论文部分内容阅读
转录因子(Transcription factor)是指能够结合在某基因上游特异核苷酸序列上的蛋白质,这些蛋白质能调控其基因的转录。转录因子可以调控核糖核酸聚合酶(RNA聚合酶,或叫RNA合成酶)与DNA模板的结合。转录因子一般有不同的功能区域,如DNA结合结构域与效应结构域。转录因子不单与基因上游的启动子区域结合,也可以和其它转录因子形成转录因子复合体来影响基因的转录。WRKY家族转录因子是植物特有的转录因子,在植物代谢和胁迫反应过程中发挥重要作用,WRKY蛋白因N-端的60个氨基酸组成的保守的WRKY结构域而得,由于WRKY蛋白结构变化丰富,功能也多种多样,在目前对WRKY蛋白的研究中,主要针对的是其在植物非生物和生物胁迫及长发育过程中的调控作用。各种逆境胁迫都会影响WRKY的表达,它是植物抗逆研究中非常重要的蛋白质。水稻中的OsWRKY97受到低温和干旱的诱导,它可能是水稻逆境反应中的一个共调节因子。本研究室运用分子生物学相关技术对OsWRKY97进行克隆与分析并通过获得OsWRKY97过量表达和抑制表达植株,从而研究OsWRKY97在水稻抗逆中发挥的作用。主要实验结果如下:1.对OsWRKY97进行生物信息学分析,该基因编码含233个氨基酸的蛋白质,等电点为8.66,其启动子序列含有多个与逆境诱导相关的顺式作用元件;运用定量qRT-PCR研究其在水稻中的表达模式,发现其表达量存在组织特异性并且能被不同的逆境胁迫所诱导,属于多逆境诱导基因;2.构建了D-163+1300-OsWRKY97过量表达载体、D-163+1300-OsWRKY97反向抑制表达载体、D-163+1300-OsWRKY97-GFP载体,通过农杆菌介导将基因转入水稻日本晴中,得到T0代正向过表达植株18株,反向抑制表达植株23株.这些植株进行了转基因检测与鉴定。3.获得了T1代的OsWRKY97准基因植株,并对转基因植株进行抗性实验:发现超表达植株增强了对部分胁迫的抗性。