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肿瘤是威胁人类健康的主要疾病,化学治疗是恶性肿瘤治疗主要手段之一。近年来,随着新的化疗药物不断问世,临床肿瘤治疗康复水平有了很大提高。但是也存在许多肿瘤化疗效果不理想的问题,影响化疗疗效的一个主要问题就是肿瘤细胞的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)。肿瘤细胞的MDR是指一种化疗药物作用于肿瘤产生耐药后,该肿瘤对结构和作用机理不同的多种抗肿瘤药物具有交叉耐药性的表现,是临床肿瘤化疗失败最常见和最难克服的问题之一,亦是复发、转移的主要原因。肿瘤细胞的MDR是一个十分复杂的生物学过程,一种化疗药物的耐药可能涉及多种耐药基因、蛋白表达的改变,而一种肿瘤细胞的耐药性也可能涉及几种耐药机制的参与。因此,为了成功地克服临床上肿瘤耐药,应首先确定该肿瘤细胞的耐药机制,而设计合理可行的逆转策略,为肿瘤化疗开创新的前景。体外培养并建立人红白血病耐Imatinib细胞系KR可以为进一步研究肿瘤细胞耐药机制及细胞信号通路在肿瘤耐药过程中的作用,为设计新的药物来防止和克服肿瘤耐药提供较理想的实验平台。我们选择K562细胞,通过剂量递增方法,以Imatinib诱导该细胞成为耐药细胞,并对其耐药机制进行了初步探讨。目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路中c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)及其下游促凋亡蛋白Bim在耐伊马替尼(Imatinib)的人红白血病K562细胞系中的作用,并探讨逆转Imatinib耐药的方法。方法:1.人红白血病耐Imatinib细胞系KR的建立体外采用Imatinib递增给药方法诱导人红白血病细胞系K562耐药,经8个月时间,建立Imatinib耐药细胞系KR。流式细胞分析测定细胞周期分布。2.KR及K562细胞蛋白表达改变的检测用Western blot方法检测KR及K562细胞中Phospho-JNK和Bim蛋白的表达。3.KR及K562细胞体外药物敏感性测定用MTS/PES确定Imatinib和/或JNK特异性抑制剂SP600125对KR和K562细胞增殖活性的影响。数据采用SPSSl3.0软件进行统计学处理,采用多个样本均数间比较的方差分析。结果:1.人红白血病耐Imatinib细胞系KR建立及培养经体外诱导后,KR细胞能稳定存活于含伊马替尼2μM的15%新生小牛血清RPMI-1640培养液中。2.KR及K562细胞蛋白表达的改变与K562细胞相比,KR细胞中Phospho-JNK表达水平明显上调,而Bim表达水平则下降;应用JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK活性后,Bim表达水平则上调。3.MTS/PES检测结果25nm SP600125联合应用2.0μM Imatinib对KR细胞的抑制率明显高于单用2.0μM Imatinib组(P=0.003)。结论:1.成功地建立了人红白血病耐Imatinib细胞系KR,能稳定存活于含伊马替尼2μM的培养体系中,KR细胞与K562细胞相比,能耐受较高浓度的Imatinib;2.在KR细胞系中存在JNK通路的激活及促凋亡蛋白Bim表达的下调;3.在KR细胞系中,JNK特异性抑制剂SP600125的应用,使Bim表达上调,诱导凋亡,一定程度上逆转了KR细胞对Imatinib的耐药性。