肺炎链球菌是引起侵染性肺炎、菌血症、脑膜炎等疾病的主要病原体,主要感染儿童、老人及免疫力低下人群。现有的预防侵染性肺炎的疫苗主要以流行率较高的肺炎链球菌荚膜多糖为免疫原,这类疫苗受到肺炎链球菌血清型的限制,覆盖面窄。随着这类疫苗的使用,血清型替代现象越发严重,开发不受血清型限制的广谱肺炎链球菌蛋白疫苗成为预防肺炎链球菌感染的研究热点。粘膜是大部分病原微生物入侵机体的主要途径,诱导粘膜组织的保护性免疫应答是阻止感染的重要策略。传统注射疫苗只能产生系统性免疫反应,而粘膜途径的疫苗可以同时诱导系统性免疫应答及粘膜免疫应答。因此,粘膜途径的疫苗被认为是阻止经由粘膜感染的病原体的理想疫苗形式。对于可溶性抗原来说,其单独应用到粘膜系统刺激免疫应答的能力有限,所以选择及开发安全有效的抗原提呈载体是粘膜疫苗的研究重点。在粘膜免疫系统中,M细胞及DC细胞是发挥抗原提呈作用的主要细胞,目前安全有效的抗原提呈载体一般以刺激这两种细胞为目标,介导粘膜局部的免疫应答以及系统性免疫应答。这其中粘膜免疫系统主要通过分泌特异性的IgA抗体抵御病原体的侵染。经研究,细菌样颗粒(BLP)作为抗原提呈载体可以应用到粘膜途径疫苗中,其模拟了天然细菌感染机体模式但安全无毒副作用,其1-10μm的尺寸能够有效的被M细胞吸收并提呈给淋巴细胞,刺激机体的免疫应答。本文利用BLP作为蛋白提呈载体,以肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)为免疫原,设计制备了一种经鼻粘膜途径使用的肺炎链球菌蛋白疫苗。PspA是肺炎链球菌重要的毒力因子之一,它通过抑制补体沉积进而保护菌体不受宿主免疫系统的清除。本文将PspA(family2 clade4,PspA4)蛋白与细胞壁水解酶C端的肽段(protein anchor,PA)进行融合,通过大肠杆菌表达系统表达PspA4-PA融合蛋白。PspA4-PA通过PA的作用非共价结合在BLP的表面,形成BLPs/PspA4-PA疫苗组分。该疫苗经小鼠体内评价,可以诱导产生较高水平的特异性IgG;与皮下免疫PspA4组相比,在鼻粘膜和支气管肺部可以显著刺激特异性IgA的分泌。在免疫后致死剂量的攻毒实验中,BLPs/PspA4-PA疫苗也表现出了较好的交叉保护作用,可以100%抵抗同PspA家族肺炎链球菌(ATCC6303)及不同PspA家族肺炎链球菌(ATCC10813)的感染的侵袭,体现了其广谱的保护作用。本论文证明,以BLP为提呈载体的PspA4肺炎链球菌蛋白疫苗以其高水平的疫苗保护作用及较低的成本未来有希望成为新一代的肺炎链球菌疫苗。另外,目前评价肺炎疫苗有效性的主要方法为动物攻毒保护实验,该方法实验周期长,成本很高,限制了现有疫苗的开发及评价进程。所以,建立更合适的体外评价肺炎链球菌疫苗的方法成为科研工作者的共识。WHO推荐以调理吞噬法体外评价肺炎链球菌多糖结合疫苗的保护性,该方法简便易行,降低了疫苗的评价周期而且可用于疫苗的质量鉴定。本论文摸索了调理吞噬方法用于PspA蛋白疫苗评价的可行性。目前该方法可以成功的进行检测人源的抗PPV23疫苗多糖抗体,检测PspA蛋白抗体的方法仍需进一步改进。