1妊娠期高血压疾病致子代动脉热休克蛋白表达改变的研究目的:妊娠期高血压疾病(Hypertension in pregnancy,HIP)发病率约为10%,目前仍是导致孕产妇和围生期胎儿致病甚至致死的主要原因之一。然而,对其短期临床表现的关注,让我们忽略了疾病对胎儿远期健康状况的影响。近年来,有越来越多的流行病学调查显示,HIP可以引起子代远期的心脑血管功能障碍,然而,我们对引起这样现象的分子机制却少有涉及。热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)是一类重要的蛋白质,参与多种生物学进程,其正常表达对机体应激时正常生理功能的进行至关重要。本研究中我们对HIP是否会造成子代血管蛋白质谱表达改变,尤其是HSP的表达情况进行研究。材料与方法:经知情同意后,在浙江大学附属妇产科医院分别收集经剖宫产生产的正常产妇和HIP产妇子代脐带组织,分离脐动脉并提出蛋白质,经样品制备等步骤,利用iTRAQ-2D-LC-MS/MS定量蛋白组学技术对两组样本进行鉴定,并进行生物信息学分析。同时,在mRNA和蛋白水平观察HSPs的表达情况。结果:在脐动脉中共鉴定到有定量信息的蛋白质1496个,其中46个在两组间表达有显著性差异(上调22个,下调24个)。通过分析,找到了一组HSP的表达水平发生了改变,包括HSP27,HSP60,HSP70和HSP90,其中HSP60在HIP组的下调尤为明显。结论:本研究证实了 HIP造成的不良宫内环境会引起子代血管蛋白质表达谱的改变,且差异蛋白与心血管系统发生发育密切相关,揭示参与HIP影响子代心血管系统的发生发育并引发远期心脑血管疾病的蛋白质。研究还找到了数个HSP在这一过程中表达水平改变,为后期分子机制的深入研究提供了思路。2利用妊娠高血压疾病动物模型观察子代成年后血管功能改变目的:近年来,胚胎源性疾病的重要性越来越受到医学和生命科学界的重视。研究者们发现,宫内不良环境会增加子代成年后多种疾病的发生风险。妊娠期高血压疾病(Hypertension in pregnancy,HIP)是一种严重的妊娠期并发症,有流行病学调查显示,HIP可导致子代成年后心脑血管疾病患病风险增加,然而,对造成该现象的机制研究仍处于空白。为了验证HIP是否造成以及在哪些方面造成子代成年后血管功能异常,我们利用动物模型进行研究。材料和方法:利用Sprague-Dawley孕鼠,在其孕13天时使用L-NAME致其血压升高直至生产(模拟人HIP疾病模式)。连续监测HIP出生组和正常出生组子代体重及血压,并在血压有特征性改变的时间点取子代肠系膜小动脉,利用微血管肌动描记技术检测其收缩和舒张能力。同时,利用HE染色观察血管形态改变。结果:利用L-NAME成功建立HIP大鼠模型。HIP出生子代组的出生体重略低于正常出生子代组,但3w后两组体重无差异。HIP出生子代组从8w开始收缩压高于正常出生子代组;舒张压在6m后也高于正常出生子代组。微血管肌动描记实验显示6m时,相比于正常出生子代组,HIP出生子代组肠系膜小动脉对收缩剂敏感程度升高,1y时HIP出生子代组肠系膜小动脉对舒张剂敏感度下降。同时可以见到HIP出生子代组肠系膜小动脉发生了形态学的改变。结论:本研究利用动物模型,证实了 HIP会导致子代成年后血压升高及血管功能障碍。在微小动脉壁结构改变的同时,随年龄增加,小动脉的收缩功能和舒张功能相继受损。由此证实了 HIP的发生可以导致子代远期心血管系统疾病发病风险增加,为进一步机制研究提供依据。3子痫前期子代胎盘及脐动脉中醛固酮受体异常剪接体的鉴定及其对血管内皮细胞功能影响的研究目的:妊娠期高血压疾病是一种严重的妊娠期并发症,子痫前期(Preeclampsia,PE)是其中最具特征的阶段和类型。PE的发病在一定程度上表现出家族聚集性,有流行病学调查提示,PE子代罹患心血管疾病的风险增加,然而对于其发病机制仍然没有机制研究。盐皮质激素受体(Mineralocorticoid receptor,MR)在体内具有介导醛固酮调节水钠代谢的重要生理作用,而PE孕妇表现出醛固酮相对不足的表现。本研究探讨MR在PE发病中的作用及对子代血管内皮细胞功能的影响。材料和方法:收集经剖宫产生产的正常和PE产妇胎盘及脐动脉,观察两组组织形态学差异。鉴定其中MR及其剪接变异体的表达,构建过表达载体并利用肾脏上皮细胞系观察MR及其剪接变异体的生物学特性,利用实时定量PCR技术鉴定MR下游因子改变。构建稳定过表达MR及其剪接变异体的血管内皮细胞,研究MR对内皮细胞功能的影响。结果:PE组子代血管相对于对照组子代管腔狭窄且结构受损。对照组和PE组子代组织中都鉴定到野生型MR(MR-WT)表达,PE组MR-WT的表达量相对对照组下调。同时,PE组还鉴定出缺失第5外显子的MR剪接变异体(MR-D5)相对于对照组高表达。利用293FT细胞构建过表达体系,发现MR-D5失去核转位能力,且致下游多个有关离子和水跨膜转运的基因表达异常。利用脐静脉内皮细胞构建稳定过表达体系,可以看出MR-D5对血管内皮细胞的增殖、迁移和成管功能均有明显阻碍,同时也影响下游信号因子的调控。结论:PE患者胎盘和脐动脉中异常高表达的MR-D5一方面可致血管内皮细胞生成和功能障碍,导致血管成管障碍,加重PE的病理生理,导致子代血管生成受损;另一方面使血管内皮细胞上水和离子通道表达异常,影响血管组织正常水及离子交换。该研究为PE发病机制和PE子代远期心血管疾病发病风险增加的原因提供了新思路。