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目的:探讨枸杞多糖对于H2O2氧化损伤人视网膜色素上皮细胞,诱导细胞自噬及Beclin-1、LC3B表达的影响。方法:1.观察过氧化氢和枸杞多糖对ARPE-19细胞存活率的影响:采用CCK8法检测不同浓度的过氧化氢对ARPE-19细胞存活率的影响,并且检测枸杞多糖对过氧化氢诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响。2.透射电镜下观察过氧化氢诱导ARPE-19细胞自噬体的情况:用不同浓度过氧化氢诱导ARPE-19细胞12h后收取各组细胞收取各组细胞置于3%戊二醛中固定、PBS洗涤、1%锇酸固定、梯度乙醇丙酮脱水、包埋、聚合、超薄切片、铅染后于投射电镜下观察细胞自噬体情况。3.免疫印迹法检测枸杞多糖对过氧化氢诱导ARPE-19细胞Beclin-1、LC3B Ⅰ和LC3BⅡ表达的影响:一组取不同浓度过氧化氢处理ARPE-19细胞12h后,4℃预冷的PBS洗2次,加入RIPA裂解液抽提细胞总蛋白定量后用免疫印迹法法测LC3B、Beclin1及β-actin抗体表达。另一组将四种浓度的枸杞多糖加入细胞培养基中,培养细胞至一定密度后加入400μmol/L过氧化氢诱导12h后处理方法同一组,收集两组数据,用ImageLab 5.0进行数据分析。结果:1.不同浓度的过氧化氢处理ARPE-19细胞后,过氧化氢对细胞增生有抑制作用且这种抑制呈梯度依赖性。加入枸杞多糖的细胞完全培养基培养ARPE-19细胞后可以明显增加细胞活力,并呈浓度依赖性,结果显示培养基中加入枸杞多糖组的细胞经过12h过氧化氢诱导后存活率明显高于未加入组,并在一定范围内随枸杞多糖浓度的增加而提高。2.不同浓度的过氧化氢诱导ARPE-19细胞12h后,200μmol/L过氧化氢组自噬体表达无明显增加,400μmol/L过氧化氢组自噬体表达相比对照组有所增加,而600μmol/L过氧化氢组自噬体表达则显著增加。3.不同浓度过氧化氢诱导ARPE-19细胞后,细胞表达Beclin-1以及LC3B Ⅰ和LC3BⅡ升高,随着H2O2浓度增加,Beclin-1以及LC3B Ⅰ和LC3B Ⅱ表达升高,呈现浓度依赖。另一组细胞培养基中加入不同浓度枸杞多糖,随着浓度增加,Beclin-1和LC3B表达降低。结论:1.一定浓度的过氧化氢会降低ARPE-19细胞存活率,抑制细胞增生,且抑制作用呈梯度依赖性,并且过氧化氢处理12h的ARPE-19细胞内自噬体表达随过氧化氢浓度的增加而增加,Beclin-1、LC3B Ⅰ和LC3B Ⅱ表达也升高。2.枸杞多糖在安全浓度范围内能减少过氧化氢对ARPE-19造成的细胞增生抑制,并且呈浓度依赖性。枸杞多糖能够降低Beclin-1、LC3B Ⅰ和LC3B Ⅱ表达,抑制H2O2诱导所致ARPE-19细胞自噬异常,抑制效应在浓度为1000μg/mL时最为显著。