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新城疫是由（Newcastle Disease,ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的可致禽类感染和死亡的急性传染病。新城疫病毒的血凝素-神经氨酸酶（HN）和V蛋白均是NDV的毒力因子,与病毒的致病性密切相关。HN蛋白作为重要的宿主保护性抗原可以诱导机体产生中和性抗体,是临床上疫苗设计和免疫检测的靶蛋白。目前HN蛋白的抗原表位尚未完全阐明,对HN蛋白的抗原表位及中和性表位研究有助于深入了解HN蛋白的抗原特性,为NDV表位疫苗的设计提供思路。V蛋白在病毒复制,致病性及拮抗干扰素方面具有非常重要的作用,然而因缺乏V蛋白单克隆抗体使许多研究变得非常困难,包括对V蛋白抗原表位的了解也极其少。因此,制备V蛋白单克隆抗体可以对V蛋白生物学特性的研究提供有力的工具。本研究首先对HN蛋白优势抗原表位进行筛选鉴定,其次进行V蛋白单克隆抗体的制备,增进了对病毒蛋白抗原表位的了解,为NDV的致病机理研究和疫苗研发提供一定支持。主要研究内容及结果如下:1. HN蛋白优势B细胞表位的筛选和鉴定（1）优势抗原表位（IDE）的筛选。利用La Sota株鸡超免抗血清靶向HN蛋白进行肽扫描分析,筛选出5个优势抗原表位区域。将其分别融合RFP基因进行真核表达,同时合成抗原多肽,通过IFA和Dot Blot验证,表明5个抗原区均是HN蛋白的IDE。（2）IDE免疫原性的分析。合成IDE多肽免疫小鼠,制备IDE抗血清。通过Dot Blot、IFA、ELISA、和Western Blot结果表明5个IDE均能够刺激小鼠产生高水平的抗体并能够特异性结合HN蛋白,其具有较好的免疫原性。IDE1、IDE2、IDE3和IDE4的抗血清能识别Calss II和Class I类毒株且其表位氨基酸序列高度保守,而IDE5抗血清只能识别Class II类毒株,其可用于鉴别此两类毒株。（3）IDE中和表位的鉴定。体外病毒中和实验结果显示IDE4抗血清对弱毒株La Sota具有部分中和活性,对强毒株F48E9和JS17的作用相对较弱,而其它IDE抗血清没有中和活性。此结果表明IDE4（242-256aa）是潜在的中和抗原表位。2. La Sota疫苗株V蛋白单克隆抗体的研究（1）单克隆抗体的制备。原核表达V蛋白C端功能域（CTD）,纯化后免疫小鼠。进行细胞融合后,应用ELISA、IFA和Western Blot进行筛选,共获得两株阳性杂交瘤细胞5C5和6D4,均能特异性识别V蛋白。（2）5C5单克隆抗体的特性。单抗5C5仅能特异性识别La Sota（基因II型）,而不能识别Class I类毒株（Pigeon/QH-1/Ch/14）及Class II类强毒株SX10（基因VI型）、JS17（基因VII型）、F48E9（基因IX型）。表明该单抗可用于鉴别基因II型疫苗株和强毒株。采用真核系统表达V蛋白的截短体分析表明其识别V蛋白的线性表位为146TSDSTAGEST 155,该表位处于V-CTD的可变区,其氨基酸序列在各毒株中差异较大。综上所述,本研究利用肽扫描技术鉴定出NDV HN蛋白的5个线性优势抗原表位和HN蛋白的潜在中和性抗原表位IDE4（242-256aa）。利用单克隆抗体技术获得了V-CTD的单抗,并鉴定出单抗5C5识别V蛋白的线性抗原表位146 TSDSTAGEST 155,该表位具有毒株特异性。为NDV的HN蛋白抗原表位和疫苗研发及V蛋白的功能研究提供基础支撑。