启膈散影响 HUVEC共培养条件下 EC9706顺铂敏感性机制

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目的:  研究启膈散与顺铂对人脐静脉内皮细胞( HUVEC)与食管癌细胞( EC9706)共培养条件下 EC9706增殖、凋亡、周期、miR-21及其下游基因表达影响,试阐述中药启膈散、顺铂对食管癌的部分作用机制。  方法:  大鼠含药血清及对照血清制备;筛选 HUVEC与 EC9706间接共培养体系合适比例、MTT检测对比单独培养 EC9706对顺铂反应和 HUVEC与 EC9706共培养条件下 EC9706对顺铂反应、抑制 HUVEC与 EC9706共培养条件下 EC9706增殖的含药血清百分比筛选以及顺铂与含药血清固定比例的筛选;析因设计方案检测含药血清和顺铂对 HUVEC与 EC9706共培养条件下 EC9706的影响;高、低表达 miR-21慢病毒转导单独培养 EC9706后对顺铂敏感性的变化。  结果:  1、 HUVEC:EC9706为数量比为0:5组的 EC9706增殖情况少于其它任何共培养组的 EC9706,其中2:5、4:5组的 EC9706均高于单独培养 EC9706组(0:5组)及其余几个共培养比例组。实验选取 HUVEC:EC9706为1:3(源于2:5)的比例进行HUVEC和 EC9706的间接共培养。  2、共培养条件下 EC9706对顺铂的 IC50是0.878μg/mL,单独培养条件下 EC9706对顺铂的 IC50是0.493μg/mL,两者比较有统计学意义( P<0.05)。  3、在2.5%血清组中,与 A相比, AD、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义(P<0.05);与 B相比,AD、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义(P<0.05)。在5%血清组中,与 A相比,AD、B、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义(P<0.05);与 B相比,AD、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义(P<0.05)。在10%血清组中,与 A相比,AD、B、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义(P<0.05);与 B相比,AD、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义(P<0.05)。在20%血清组中,与 A相比, AD、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义( P<0.05);与 B相比, AD、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义( P<0.05)。  4、在1组中,与 A相比,AD、B、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义(P<0.05);与 B相比, AD、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义( P<0.05)。  在2组中,与 A相比,AD、B、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义(P<0.05);与 B相比,AD、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义( P<0.05)。在3组中,与A相比,AD、BD的 OD值下降、B的 OD值增加、差异具有统计学意义( P<0.05);与 B相比,AD、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义( P<0.05)。在4组中,与A相比,AD、BD的 OD值下降、B的 OD值增加、差异具有统计学意义( P<0.05);与 B相比, AD、BD的 OD值下降、差异具有统计学意义( P<0.05)。  5、在第1组中,与1A相比,1AD、1BD的 G1、G2期百分比下降、1B和1BD的 G2期百分比增加、1AD、1BD的 S期百分比增加、差异具有统计学意义(P<0.05);与1B相比,1AD、1BD的 G1期百分比下降、1AD的 G2期百分比下降、1BD的 G2期百分比增加、1AD、1BD的 S期百分比增加、差异具有统计学意义( P<0.05);与1AD相比,1BD的 G1期百分比下降、1BD的 G2期百分比增加、差异具有统计学意义(P<0.05)。在第2组中,与2A相比,2BD的 G1期百分比下降具有统计学意义(P<0.05)。  6、在第1组中,与1A相比,1AD、1BD的早期凋亡比增加、1B的早期凋亡比下降、1AD、1BD的晚期凋亡比增加、1B的晚期凋亡比下降、差异具有统计学意义(P<0.05);与1B相比,1AD、1BD的早、晚期凋亡比增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与1AD相比,1BD的早期凋亡比下降、1BD的晚期凋亡比增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。在第2组中,与2A相比,2AD、2BD的早、晚期凋亡比增加、2B的早期凋亡比下降、差异具有统计学意义(P<0.05);与2B相比,2AD、2BD的早、晚期凋亡比增加、差异具有统计学意义( P<0.05);与2AD相比、2BD的晚期凋亡比增加、差异具有统计学意义(P<0.05)。  7、在第1组中,与1A相比,1AD、1B、1BD的 miR-21表达下降、1AD、1BD的 PDCD4表达增加、1BD的 Fas表达增加,差异具有统计学意义( P<0.05);与1B相比,1AD、1BD的 miR-21表达下降、1AD、1BD的的 PTEN表达增加、差异具有统计学意义(P<0.05)。在第2组中,与2A相比,2B的 miR-21表达增加、2AD、2BD的 PDCD4表达增加、2AD、2BD的 PTEN表达增加、2AD、2BD的 Fas表达增加、2B的 Fas表达降低,差异具有统计学意义( P<0.05)。与2B相比,2AD的miR-21表达增加、2BD的 miR-21表达下降,2AD、2BD的 PDCD4表达增加、2AD、2BD的 PTEN表达增加,2AD、2BD的 Fas表达增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与2AD相比,2BD的 miR-21表达下降、2BD的 Fas表达增加,差异具有统计学意义( P<0.05)。  8、在第1、2组中,各组织间同蛋白表达差异均无统计学意义。  9、与 control相比, miR-21慢病毒组顺铂 IC50升高、差异具有统计学意义( P<0.05)。与 miR-21-Inhibitor慢病毒组相比, miR-21慢病毒组顺铂 IC50升高、差异具有统计学意义( P<0.05)。  结论:  1、 HUVEC能促进 EC9706的增殖速度或是抑制其凋亡等,HUVEC与 EC9706共培养可削弱顺铂对 EC9706的细胞毒作用。  2、启膈散含药血清可增加 HUVEC共培养 EC9706下 EC9706顺铂敏感性,可能与诱导阻滞在 S期的细胞比增高以及与顺铂协同下调 miR-21表达、上调 Fas表达相关。  3、 miR-21在促进 EC9706顺铂耐药方面发挥相关作用。
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