【摘 要】
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隐球菌,马尔尼菲篮状菌和曲霉菌是临床上最为常见的三种侵袭性真菌,它们通过入侵人体皮肤及皮下组织、黏膜、血液及内脏,并大量增殖,导致人体组织受到破坏、器官功能受损,进一步危及人的生命安全;侵袭性真菌的感染给全球卫生系统带来了相当大的经济负担,并对全球公共卫生造成越来越大的威胁,但是目前基因型与临床致病相关性的报道较少,因此如何快速、准确地对致病真菌进行分类和鉴定,对侵袭性真菌感染的预防和诊断具有重要
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隐球菌,马尔尼菲篮状菌和曲霉菌是临床上最为常见的三种侵袭性真菌,它们通过入侵人体皮肤及皮下组织、黏膜、血液及内脏,并大量增殖,导致人体组织受到破坏、器官功能受损,进一步危及人的生命安全;侵袭性真菌的感染给全球卫生系统带来了相当大的经济负担,并对全球公共卫生造成越来越大的威胁,但是目前基因型与临床致病相关性的报道较少,因此如何快速、准确地对致病真菌进行分类和鉴定,对侵袭性真菌感染的预防和诊断具有重要意义。基于此,本研究分别采用MLST分型方法对隐球菌和马尔尼菲篮状菌进行基因多样性的研究,采用NGS结合实时荧光定量PCR的技术对曲霉菌进行基因多样性的研究,并结合临床表现特征进行相关性的研究,为今后临床上指导和诊断侵袭性真菌病提供科学依据。对415例隐球菌进行基因多样性的研究,通过MLST分型方法分出了三种基因型:VNI（411/415）和VGI（3/415）、VGII（1/415）。VNI型鉴定出了6种序列型:ST31、ST5,、ST93、ST191、ST174和ST53。对其中4个未报道过的4种序列型的7个等位基因的突变位点进行整理与分析,其符合新序列型的命名规则,所以将其命名为:ST577、ST578、ST579（VGI）和ST580（VGII）;对人口学资料进行了整理,男性占68%（282/415）,女性占32%（133/415）,男女比例为2.12:1,患者的年龄范围为12到74岁,其中在40至49岁之间的患者较多;对临床信息进行整理,并将基因型与临床表现相结合,用SPSS软件进行分析,在未合并感染HIV的隐球菌感染者中,ST5型与肝损伤（P=0.009）之间存在统计学差异,因此,在未感染HIV的患者中,ST5型更容易导致肝损伤。对马尔尼菲篮状菌进行基因多样性的研究,在125例样本中分出了82种序列型,其中有5例与之前研究所分出的序列型一致:ST12、ST14、ST34、ST25和ST31,有120例鉴定出了77个新的ST,对他们的5个基因的突变位点进行整理与分析,其符合新序列型的命名规则,所以将其命名为:ST43-ST121;对人口学资料进行了整理,男性占75.2%（94/125）,女性占18.4%（23/125）,男女比例为4:1,在40至49岁之间的感染者较多,其中多数患者为云南籍,全部都为合并HIV感染,并整理了50例样本的CD4+指标,多数患者CD4+＜20;对他们的临床信息进行整理,并将基因型与临床表现相结合,用SPSS软件进行分析;发现感染者在不同的CD4+指标情况下,与临床诊断存在相关性,患者在感染了马尔尼菲篮状菌后,不同的免疫情况会在临床上与肝损伤（P=0.025）,头痛（P=0.036）和口腔念珠菌感染（P=0.026）的临床表现中有影响。对33例GM阳性的肺泡灌洗液样本进行NGS检测,结果显示曲霉属占据群落的主要地位,是最主要的致病菌,因此对曲霉菌属进行实时荧光定量PCR,检测临床样本中常见的曲霉菌属病原菌,检测出烟曲霉菌（15/33）、黄曲霉菌（16/33）、黑曲霉菌（2/33）,其中黄曲霉的阳性率最高（48.48%）;对他们的人口学资料进行了整理,男性占69.7%（23/33）,女性占30.3%（10/33）,男女比例为2.3:1,患者的年龄范围为28到89岁,其中在60至69岁之间的患者较多,患者在临床上的表现多数为支气管肺部感染,肺结核以及鼻窦炎;对临床信息进行整理,将基因型与临床表现相结合,用SPSS软件进行分析,烟曲霉与鼻窦炎（P=0.027）,输尿管曲霉菌病（P=0.041）有统计学意义,黄曲霉与鼻窦炎（P=0.02）之间具有统计学意义。综上所述,本论文对常见的三种侵袭性真菌进行了基因多样性的分析,命名了4种新的隐球菌序列型与77种新的马尔尼菲篮状菌序列型,并将每一种基因型与临床表现进行相关性的分析,为临床的指导和快速诊断提供依据。
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