从麦芽根中提取5’-磷酸二酯酶的工艺研究

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论文利用麦芽根为原材料,制备高纯度以及高生物活性的5’-磷酸二酯酶,为综合利用麦芽根资源提供新的途径,实现企业的可持续发展。本文主要研究了麦芽根中5’-磷酸二酯酶的分离纯化工艺:分析了麦芽根的基本成分,对麦芽根进行预处理,优化浸提条件,选用微滤膜除杂,硫酸铵盐析沉淀,超滤膜浓缩脱盐纯化粗酶液,采用冷冻干燥技术对浓缩液进行干燥,得到高纯度和高生物活性的5’-磷酸二酯酶制剂。研究内容和主要结果如下:麦芽根主要成分及含量:粗蛋白含量为30.1%,粗脂肪含量为1.7%,粗纤维含量为15.8%,多糖含量为14.8%,水分含量为5.7%,灰分含量为6.6%。为了提高5’-磷酸二酯酶的浸出率,将麦芽根粉碎至100目。采用醋酸盐缓冲液浸提,经过实验优化确定了最佳的浸提工艺:浸提pH=6、料液比1:10、浸提时间16h、浸提温度4℃。在此条件下,浸提液中5’-磷酸二酯酶的总活力为9361U。采用微滤膜对粗酶液进行初步纯化,去除大量的悬浮物及大分子杂蛋白;选择饱和度为40%的硫酸铵对微滤透过液作一步盐析沉淀,去除杂蛋白和其它杂质;采用超滤膜浓缩酶液,脱去酶液中大量的无机盐和水分。经过纯化,5’-磷酸二酯酶比活力提高到3018.9U/mg,酶活力回收率达到80.8%。实验中所用的膜设备经过清洗,其通量均可恢复到原始通量的96%以上。采用冷冻干燥技术对5’-磷酸二酯酶进行干燥,实验优化并确定了冷冻干燥的工艺参数:送料厚度为8mm,真空度维持在60Pa下,加热板起始温度为75℃,以每2小时降温5℃,加热板终止温度为45℃,在此工艺参数下,冷冻干燥效率平均为145.2g/h·m2。经过冷冻干燥处理得到的5’-磷酸二酯酶产品为白色粉末,溶解性好,酶比活力达到3782.4U/mg,含水量低于3%。采用SDS-PAGE法测定实验制备的麦芽根5’-磷酸二酯酶的分子量为29.2kD。考察了麦芽根5’-磷酸二酯酶的最适pH值为5,最适温度为70℃。考察了麦芽根5’-磷酸二酯酶的稳定性。该酶在pH值57之间比较稳;在5070℃之间酶活性保持较高;Mg2+对该酶的活性有显著的促进效果,而Ca2+、Cu2+、Fe2+、Zn2+、Mn2+对该酶的活性均有一定的抑制作用。该酶在-5℃下贮存时,酶活力基本无损失,稳定性很高。
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