富集人表皮干细胞的角质形成细胞群的分离及UVB诱导其调亡的研究

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表皮干细胞具有自我更新和多潜能性,其主要作用是维持正常状态下的表皮的动态平衡。此外,创伤后能够广泛并且持续的自我更新从而促进创伤愈合。表皮干细胞单位是致癌突变蓄积的主要靶点。过度暴露于紫外线照射是90%皮肤癌的发生发展的主要原因而中波紫外线诱导的角质形成细胞凋亡是皮肤癌的重要防御机制。本研究的目的是分离富集人表皮干细胞的角质形成细胞群并且研究中波紫外线对其凋亡的诱导。   目的:   本研究的目的是分离并鉴定富集人表皮干细胞的角质形成细胞群及正常的人原代角质形成细胞群,并且探讨中波紫外线是否能够诱导两种细胞群的凋亡反应,同时比较两种细胞群凋亡反应出差异。   方法:   我们利用快速粘附Ⅳ型胶原的方法分离快速粘Ⅳ型胶原的人角质形成细胞群同时利用传统方法制备了人正常的角质形成细胞群并对两组细胞进行了免疫荧光标记鉴定两种细胞β1整合素,p63和广谱角蛋白(C11)的表达。我们使用0—80 mJ/cm2的中波紫外线照射快速粘Ⅳ型胶原的人角质形成细胞群和正常人原代角质形成细胞群,之后利用相差显微镜,Hoechst33342染色,流式细胞计数和蛋白印迹等方法观察并比较两组细胞的凋亡反应及差异。   结果:   我们成功分离了快速粘附Ⅳ型胶原的人角质形成细胞群和人正常角质细胞群;免疫荧光标记结果显示快速粘附Ⅳ型胶原的人角质形成细胞群高表达β1整合素和p63蛋白低表达广谱角蛋白(C11),人正常角质细胞群低表达β1整合素和p63蛋白高表达广谱角蛋白(C11),差异显著(P<0.05)。快速粘附Ⅳ型胶原的人角质形成细胞群于40和80 mJ/cm2的中波紫外线照射时出现显著的凋亡反应。然而对照组的正常角质形成细胞群则只在80 mJ/cm2的中波紫外线照射时出现显著的凋亡反应。与未照射的细胞比较,80 mJ/cm2中波紫外线照射明显增加了人原代角质形成细胞的凋亡细胞数量,而40和80 mJ/cm2中波紫外线照射明显增加了快速粘附Ⅳ型胶原的人角质形成细胞群的凋亡细胞数量(P≤0.05)。40 mJ/cm2中波紫外线照射后快速粘附Ⅳ型胶原的人角质形成细胞群的凋亡细胞比率显著高于人原代角质形成细胞的凋亡细胞比率(P≤0.05)而存活细胞的比率显著降低(P≤0.05)。与人原代角质形成细胞不同快速粘附Ⅳ型胶原的人角质形成细胞群于40 mJ/cm2中波紫外线照射后明显有凋亡反应。   结论:   我们分离的快速粘附Ⅳ型胶原的人角质形成细胞群具有人表皮干细胞的特性是富集了人表皮干细胞的细胞群。研究结果表明人表皮干细胞于中波紫外线的照射时会经历凋亡,并且比其它的角质形成细胞易感。此方法可以用于人表皮干细胞特性的体外研究。
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