灵芝活性成分的制备及其残渣利用

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灵芝(Ganoderma lucidum)属于担子菌纲、多孔菌科、灵芝属,是一种珍贵的药用真菌。灵芝的主要功效成分为灵芝多糖和灵芝三萜,具有多种药理作用,因此高效制备灵芝活性成分备受关注。灵芝提取后残渣剩余量较大,资源利用率低,研究灵芝残渣环保利用方式具有非常重要意义。本文以南韩灵芝为原料,研究了不同提取方法对灵芝多糖、三萜性质及活性的影响,优化了提取工艺,并对该工艺条件下提取的多糖进行了分离纯化及三萜成分分析;同时对混合菌种发酵灵芝残渣的工艺进行了研究,为高效利用灵芝提供基础理论依据。本文主要研究内容及结论如下:1.比较不同提取方法对灵芝多糖、三萜提取得率、理化性质及体外降脂活性的影响。结果表明,酶法提取多糖、三萜得率最高;不同方法提取的多糖分子量和单糖组成不同;体外降脂活性研究发现,酶法提取的多糖结合胆酸盐的能力最强。红外、紫外光谱和高效液相色谱分析显示不同方法提取的三萜均有相似的结构特征;酶法提取的三萜体外结合胆酸盐的能力强于其他方法。综合以上结果,确定酶法较适合提取灵芝活性成分。2.利用响应面法优化酶法提取灵芝多糖和三萜工艺,最优提取多糖工艺为:添加3.5%纤维素酶、4.0%半纤维素酶、3.0%木瓜蛋白酶,在pH 5.70、50℃下提取81 min时,多糖提取得率为3.73%;最优提取三萜工艺为:添加3.0%纤维素酶、4.0%半纤维素酶、3.0%木瓜蛋白酶,在pH 5.00、50℃下提取90 min时,三萜提取得率为1.28%。3.使用最优提取工艺条件提取的灵芝多糖,经Sevage法除蛋白、DEAE-52纤维素柱色谱和SephadexG-100凝胶柱色谱分离纯化得到两种分子量均一的多糖(GLP-1、GLP-2)和一种糖肽物质(GLP-3)。GLP-1和GLP-2相对分子量分别为67.78 kDa和45.12 kDa,均由Man、Rha、Glc和Gal 4种单糖组成;GLP-3成分分析表明含有糖、氨基酸和糖肽键。GLP-1、GLP-2和GLP-3均表现出较好的结合胆酸盐能力。通过超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术分析了酶法提取的三萜成分,共鉴定出5种三萜,分别为灵芝酸G、灵芝烯酸D、灵芝酸C1、ganolucidic acid E和灵芝酸A。4.优化了混合菌(平菇、绿色木霉菌和地衣芽孢杆菌)固态发酵麦麸和灵芝残渣的工艺条件。发酵工艺为:麦麸和灵芝残渣比例1:0.4、接种量10%、发酵时间6 d,在此条件下粗蛋白含量达到了29.10%。结果表明,通过混合菌固态发酵灵芝残渣的工艺优化,可以提高蛋白含量,且该优化条件可应用于放大生产制备生物饲料。
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