论文部分内容阅读
目的：研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌HepG2细胞的体外作用,观察IP6对肝癌细胞的增殖和凋亡的影响并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养HepG2细胞,将不同浓度的IP6作用HepG2细胞一段时间,分别进行以下研究：1应用MTT法观察IP6对HepG2细胞增殖的影响；2应用平板集落形成实验检测IP6对HepG2细胞克隆形成能力的影响；3应用免疫细胞化学法检测IP6对HepG2细胞内增殖细胞核抗原PCNA、突变型p53、细胞周期抑制蛋白p21表达的影响；4应用RT-PCR法检测细胞癌基因Mdm2的表达情况；5流式细胞仪检测IP6对HepG2细胞作用后细胞凋亡率的影响；6 Western Blot检测IP6对HepG2细胞作用后核转录因子NF-κB p65的表达变化。结果：1 MTT实验结果显示,IP6能够抑制HepG2细胞的增殖,同一作用时间,随IP。浓度的增高,OD值逐渐降低(F=4.214、4.952,q=1.562-3.784,P<0.05),同一作用剂量,随时间的延长,OD值升高(F=6.798,q=3.687,p<0.05)。2平板集落形成实验结果表明,经IP6作用的HepG2细胞的集落形成能力随作用浓度的增高逐渐降低,而克隆形成抑制率随浓度的增高逐渐升高(F=122.287,q=2.595-17.103,p<0.05)。3免疫细胞化学实验结果表明,与对照组相比,不同浓度的IP6对PCNA的表达有明显的抑制作用(F=21.491,q=2.243-7.341,p<0.05),可抑制p53蛋白的异常表达(F=51.927,q=3.057-10.894,p<0.05),促进p21蛋白的表达(F=52.520,q=2.473-11.631,p<0.05)。4 RT-PCR实验结果显示,与对照组相比,各IP6作用组Mdm2 mRNA表达均显著降低,差别具有统计学意义(F=13.698,q=2.843-5.556,p<0.05)。5流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比,各IP6作用组HepG2细胞凋亡率均有升高(F=342.15,q=2.98-28.53,p<0.05),并且随药物高浓度增大,各IP6作用组细胞凋亡率逐渐升高(p<0.05)；6 Western Blot实验显示,经IP6作用的HepG2细胞与对照组相比NF-kB p65蛋白的表达下降(F=-8.472,q=2.679-4.770,p<0.05)。结论：IP6对HepG2细胞的体外生长具有抑制作用,IP6可能通过抑制增殖细胞核抗原PCNA和p53蛋白、促进p21蛋白的表达而发挥其抑制细胞增殖的作用；同时IP6还可能通过抑制癌基因Mdm2的表达、抑制NF-kB p65信号转导通路,从而促进癌细胞凋亡。