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目的:观察survivin在TGF-β1诱导HTFs增殖过程中的表达,以及在HTFs中的定位,在细胞生物学方面为研究青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化提供思路。方法:1.对获取的青光眼滤过术患者Tenon’s囊组织进行原代培养及传代,并进行细胞免疫荧光鉴定;2.实验分为空白对照组和TGF-β1处理组(5、10、15、20ng/ml),培养24h、48h,分别用CCK-8检测HTFs的增殖活性,RT-PCR、Western-blot检测survivin m RNA及蛋白的表达,HE染色、免疫组化分别观察空白对照组和10 ng/ml TGF-β1组细胞的形态学变化、survivin定位及表达。结果:1.组织块培养法培养5-7天即可看到组织块周围细胞爬出,10-14天长满6孔板,细胞免疫荧光鉴定其为HTFs。2.CCK-8结果显示,诱导24h时,不同浓度(5、10、15、20ng/ml)TGF-β1处理组和空白对照组相比较,细胞的增殖活性表达差异无统计学意义;诱导48h时,与空白对照组相比较,10、15ng/ml TGF-β1组细胞增殖活性表达较多,差异具有统计学意义(P<0.05),并且与24h空白对照组和TGF-β1组两两相比较,细胞增殖活性均高表达,其中10、15ng/ml TGF-β1组细胞增殖活性表达差异具有统计学意义(P<0.05)。3.RT-PCR结果显示,诱导24h时,空白对照组和不同浓度(5、10、15、20ng/ml)TGF-β1处理组可见survivin m RNA表达,与空白对照组相比较,不同浓度TGF-β1处理组survivin m RNA表达均较多,差异具有统计学意义(P<0.05),其中10ng/ml TGF-β1组survivin m RNA表达最多,分别与5、20ng/ml TGF-β1组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);诱导48h时,空白对照组和不同浓度(5、10、15、20ng/ml)TGF-β1处理组可见survivin m RNA表达,与空白对照组相比较,不同浓度TGF-β1处理组survivin m RNA的表达趋势与24h一致,并且与24h时不同浓度的TGF-β1组两两相比较,survivin m RNA表达较多,差异均具有统计学意义(P<0.05);4.Western-blot结果显示,不同浓度(5、10、15、20ng/ml)TGF-β1处理24h时均可见survivin蛋白表达,10ng/ml TGF-β1组survivin蛋白表达最多,分别与5、15、20ng/ml TGF-β1组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);诱导48h时,survivin蛋白的表达趋势与24h一致,并且与24h时不同浓度的TGF-β1组两两相比较,survivin蛋白表达较多,差异均具有统计学意义(P<0.05)。5.与空白对照组相比较,TGF-β1(10ng/ml)组细胞形态学无明显差别,但细胞数量相对增多,增殖较明显。6.Survivin蛋白主要表达在细胞质,与空白对照组比较,TGF-β1组survivin蛋白表达更多。结论:1.Survivin在TGF-β1促进HTFs增殖过程中呈高表达,10 ng/ml TGF-β1诱导48h表达量最多;2.Survivin蛋白在HTFs中主要表i达在细胞质,可能参与细胞存活。