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目的：一、探讨寿胎丸不同药物浓度、不同作用时间对HLA-G各亚型mRNA、蛋白表达的影响。二、探讨寿胎丸不同药物浓度、不同作用时间对ILT2、KIR2DL4基因mRNA、蛋白表达的影响。三、探讨传统方剂寿胎丸对母胎界面HLA-G配体及其受体KIR2DL4、ILT2介导的信号通路的作用,及其在治疗不明原因习惯性流产中的作用。四、探讨HLA-G各亚型在不明原因习惯性流产中的时序作用。方法：一、培养特异性表达HLA-G的JEG-3细胞,及表达ILT2、KIR2DL4受体的NK92细胞。二、取对数生长期、状态良好的JEG-3细胞及NK92细胞,分别均匀接种于24孔板,每12小时取4个孔进行计数,至每孔细胞丰度达100%,以培养时间为横轴,细胞数目为纵轴绘制生长曲线。三、通过MTT细胞增殖与毒性实验,确定含寿胎丸冻干粉培养基分别作用于JEG-3细胞、NK92细胞的有效作用浓度范围,制定浓度梯度。四、不同浓度梯度含寿胎丸冻干粉培养基作用于JEG-3细胞、NK92细胞,培养60小时,RT-PCR检测每12小时HLA-G各亚型、ILT2、KIR2DL4基因mRNA表达的情况。五、不同浓度梯度含寿胎丸冻干粉培养基作用于JEG-3细胞、NK92细胞,用流式细胞术检测每12小时膜型全长HLA-G1、ILT2、KIR2DL4蛋白表达的情况。六、取对数生长期、状态良好的JEG-3细胞及NK92细胞,按不同数目比例进行共培养24小时,MTT细胞毒性实验确定效靶比。七、数据经SPSS13.0统计软件处理,采用重复测量方差分析,得到各基因整体趋势,及时间因素、浓度因素、交互效应对各基因表达的贡献大小。对数据进行拆分,采用重复测量数据多重比较配对t检验(Bonferroni法)进行相同浓度各时间点上的两两比较；采用多因素方差分析进行相同时间点上不同药物浓度组间的两两比较。结果：一、寇式法计算含寿胎丸培养基进行JEG-3细胞培养的IC50浓度为1.884mg/ml, NK92细胞培养的IC50浓度为0.6088mg/ml。二、不同时间、不同药物浓度均对HLA-G1 mRNA的表达有影响,且存在交互作用(F=775.340, P=0.000)。 3mg/ml对表达起抑制作用,2mg/ml及以下浓度于24h解除抑制后对HLA-G1 mRNA表达起促进作用,以0.5mg/ml组最显著。以36h为界点,36h前HLA-G1mRNA表达与浓度成正比；36h后HLA-G1mRNA表达与浓度呈反比。三、不同时间、不同药物浓度均对HLA-G2 mRNA的表达有影响,且存在交互作用(F=102.692, P=0.000)。0.5mg/ml组与时间成正比,其他浓度组表达水平与时间因素间无依赖性,各浓度组表达最高点均位于60h时。低于3mg/ml药物浓度于24h短暂抑制后随时间对HLA-G2mRNA表达具有促进作用,以0.5mg/ml浓度最显著。四、不同时间、不同药物浓度均对HLA-G3 mRNA的表达有影响,且存在交互作用(F=203.727,P=0.000)。各浓度组均在12h时表达水平最低,48h时出现第二个低谷,60h时表达最高,表达水平与时间因素无依赖关系。各时间点HLA-G3mRNA的表达均与浓度呈反比。60h表达以0.5mg/ml最高,且0.5mg/ml组各时间点表达水平始终位于对照组水平以上。五、不同时间、不同药物浓度均对HLA-G4 mRNA的表达有影响,且存在交互作用(F=197.812,P=0.000)。除0.5mg/ml组与时间成正比外,其他浓度表达水平与时间因素间无依赖性,各浓度组60h时表达水平最高；0.5mg/ml组24h后表达水平均在同时间其他浓度组以上,且各时间点表达均高于对照组。六、不同时间、不同药物浓度均对HLA-G5 mRNA的表达有影响,且存在交互作用(F=472.895,P=0.000)。各浓度对HLA-G5mRNA表达24h后均为促进作用,且与时间成正比。七、不同时间、不同药物浓度均对HLA-G6 mRNA的表达有影响,且存在交互作用(F=295.869, P=0.000)。2mg/ml、3mg/ml浓度对HLA-G6mRNA表达起促进作用,60h时表达水平最高。1.5mg/m1、0.5mg/ml浓度对HLA-G6mRNA表达起抑制作用。八、不同时间、不同药物浓度均对HLA-G7 mRNA的表达有影响,且存在交互作用(F=468.075,P=0.000)。3mg/ml浓度组随时间积累无明显促进作用,2mg/m1及以下浓度组随时间起促进作用。九、不同时间、不同药物浓度均对KIR2DL4 mRNA的表达有影响,且存在交互作用(F=326.133,P=0.000)。各浓度组表达水平均与时间因素无依赖性,24h时表达最低,36h时表达最高；12h、48h、60h各浓度组间无差异,24h、36h表达水平与浓度成反比,0.5mg/m1组各时间点均不低于其他浓度组及对照组。十、不同时间、不同药物浓度均对ILT2 mRNA的表达有影响,且存在交互作用(F=1487.783,P=0.000)。表达水平与时间因素无依赖性。48h、60h各浓度组表达水平相等,其余时间点表达水平与浓度成反比。2mg/ml、1.5mg/ml浓度各时间点均不高于对照组,无显著促进作用；0.5mg/ml浓度各时间点表达均不低于对照组,具有促进作用。十一、不同时间对HLA-G1蛋白的表达有影响(F=53.102,P=0.000),不同浓度24小时内对HLA-G1蛋白表达无影响(F=1.609,P=0.247)。各浓度表达水平与时间因素成反比,12h表达水平高于24h表达水平；12h时表达水平与浓度成正比,24h时表达水平与浓度成反比。24h内药物对HLA-G1蛋白表达无显著促进作用,0.5mg/ml以上浓度抑制作用明显。十二、不同时间对ILT2蛋白的表达有影响(F=23.946,P=0.001),不同浓度24小时内对ILT2蛋白表达有影响(F=8.894,P=0.002),二者无交互作用(F=1.579,P=0.254)。各浓度表达水平与时间因素成正比,各时间点表达水平均在对照组以上；各时间点表达水平与浓度成反比,表达水平均在对照组以上。十三、寿胎丸在24小时内对KIR2DL4蛋白在NK92细胞表面的低表达状态无作用(P≥0.423)。十四、以NK92细胞作为效应细胞,JEG-3细胞为靶细胞,当效靶比为10：1时杀伤率高达60.40%,效靶比5：1-1：1抑制率在50%以下,且无统计学差异(P≥0.05),后续实验选择1：1比例进行。结论：一、寿胎丸可促进HLA-G基因7种亚型的表达,且存在浓度效应、时间效应及相互效应。二、寿胎丸可促进ILT2、KIR2DL4基因的表达,且存在浓度效应、时间效应及相互效应。三、寿胎丸可能通过上调HLA-G、KIR2DL4、ILT2基因表达,促进NK细胞抑制性信号的传导,诱导母胎界面免疫耐受；寿胎丸可能通过HLA-G介导的信号通路在治疗不明原因习惯性流产中发挥作用。