深海邻苯二甲酸酯降解菌的分离鉴定与降解特性研究

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以邻苯二甲酸二甲酯(DMPEs)的三种同分异构体(邻苯二甲酸二甲酯(DMP),间苯二甲酸二甲酯(DMI),对苯二甲酸二甲酯(DMT))为底物,从大西洋与印度洋深海底质样品中富集分离到22株邻苯二甲酸酯(PAEs)降解菌,包括7株细菌,8株酵母菌和7株丝状真菌。通过细菌的16S rDNA、酵母菌的26S rDNA的D1/D2区、真菌的ITS序列分析结合形态学观察对这些PAEs降解菌进行分类鉴定。结果显示,细菌分属于假单胞菌、微球菌、以及芽胞杆菌属,酵母菌中包括红酵母、赤色酵母和海冬孢酵母,丝状真菌包括曲霉和青霉,显示了极高的种属多样性。  菌株的PAEs降解效率定量分析显示,所有菌株对其筛选底物都有不同程度的降解能力。其中一株红酵母菌Rhodotorula mucilaginosa05-MAR-Y3具有很强的PAEs降解能力,可在6天内完全降解30 mg/1的DMT,因此被选出来进行进一步的研究。分析Rhodotorula mucilaginosa05-MAR-Y3对于DMPEs的三种同分异构体的降解途径,发现菌株对于不同同分异构体的DMPEs,其降解途径有很大的差异。其对于对位的DMPEs(DMT),可将其经由单酯转化为对苯二甲酸,但不能继续降解对苯二甲酸。而对于间位的DMPEs(DMI),只能通过一步酯水解反应将其转化为单酯,但间苯二甲酸单甲酯为代谢终产物,进一步的降解没有发生。而对于邻位DMPEs(DMP)的降解,其能将二酯通过酯水解反应转化为单酯,并进一步降解单酯,但是,单酯的降解并未形成邻苯二甲酸,而是通过一条未知的途径进行降解。具体到单酯如何再进一步降解,目前还不清楚,需要进一步的研究。上述结果暗示深海酵母菌Rhodotorula mucilaginosa05-MAR-Y3在降解不同同分异构体的DMPEs时,其产生的水解酯酶具有高度的底物特异性。  为了进一步的验证上述推测,我们以DMT为诱导底物从Rhodotorulamucilaginosa05-MAR-Y3分离纯化到一个酯酶蛋白。该酯酶蛋白为胞内蛋白,分子量92 kDa,由两个相同的亚基组成。酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为8。Cu2+、EDTA对酶活性有显著抑制作用,Zn2+可轻微抑制酶活性,Ni2+、Mn2+、Mg2+、Ca2+、K+、Na+、Sr2+等金属离子对酶活无影响。底物特异性分析显示,该酶只能水解邻苯二甲酸二甲酯的三种同分异构体,而对单酯则不能水解,显示了很好的底物特异性。这一结果也证实了深海真菌酯酶在参与DMPEs苯环上两个酯健的水解过程中具有高度的底物选择性和特异性,并且有不同的酯酶参与到不同的酯健水解过程中。
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