下调LMTK3表达对肺鳞癌SK-MES-1细胞生物学行为的影响及其机制

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目的:探讨慢病毒介导的Lemur酪氨酸激酶3(Lemur tyrosine kinase-3,LMTK3)基因沉默对肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖、细胞周期和侵袭能力等生物学行为的影响及其分子作用机制。方法:采用LMTK3-短发卡RNA(LMTK3-small hairpin RNA,LMTK3-sh RNA)慢病毒质粒转染肺鳞癌SK-MES-1细胞,嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株。通过实时定量聚合酶链反应(Real-Time quantitative polymerase chain reaction,Real-Time q PCR)和Western blot检测转染后细胞中LMTK3、β-连环蛋白(β-catenin)和周期素D1(cyclin D1)基因沉默情况。同时进行细胞功能实验:细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit,CCK-8)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell侵袭实验分析细胞侵袭能力。结果:LMTK3-sh RNA有效沉默LMTK3基因在肺鳞癌SK-MES-1细胞中的转录和翻译。实验(LMTK3-sh RNA)组细胞中LMTK3 m RNA相对表达量(0.24±0.18)显著低于空白对照(mock)组(1.00±0.18)和阴性对照(NC)组(0.93±0.19),(P<0.05)。实验组细胞LMTK3蛋白表达量(0.49±0.07)亦显著低于mock组(1.00±0.11)和NC组(0.99±0.07),(P<0.05)。LMTK3基因沉默可抑制细胞中β-catenin和cyclin D1的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LMTK3-sh RNA转染抑制了SK-MES-1细胞的增殖;实验组细胞周期明显阻滞于G1期;实验组、mock组和NC组穿膜细胞个数分别为(45±5)、(198±8)、(171±4)个,实验组与mock及NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LMTK3基因沉默可显著抑制SK-MES-1细胞的增殖、侵袭能力,并阻滞细胞周期于G1期,其机制可能与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制有关。
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