【摘 要】
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由于纳米材料的应用日趋广泛,许多关于纳米材料对生物体毒性效应的研究不断被报道。线粒体氧化应激、ROS产生及积累、凋亡蛋白的激活和内质网应激都是纳米材料对生物体产生毒性效应的途径。而细胞膜是细胞抵御外界有害物质的第一道防线,是细胞正常生命活动的保障。因此,纳米材料对细胞膜的作用,是纳米材料在生物医学领域应用首先需要解决的问题。细胞膜电位被认为是反映细胞代谢活性和细胞活力的重要参数,也是评价细胞膜状态
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由于纳米材料的应用日趋广泛,许多关于纳米材料对生物体毒性效应的研究不断被报道。线粒体氧化应激、ROS产生及积累、凋亡蛋白的激活和内质网应激都是纳米材料对生物体产生毒性效应的途径。而细胞膜是细胞抵御外界有害物质的第一道防线,是细胞正常生命活动的保障。因此,纳米材料对细胞膜的作用,是纳米材料在生物医学领域应用首先需要解决的问题。细胞膜电位被认为是反映细胞代谢活性和细胞活力的重要参数,也是评价细胞膜状态的一个重要指标,在已有的研究中表明纳米材料会引起细菌细胞膜发生去极化及体细胞细胞膜电位的改变,但对于被透明带包裹的胚胎细胞膜电位的影响并不清楚。因此我们推测当早期胚胎与纳米材料接触时,可能在很短的时间内对细胞膜产生影响,并改变细胞膜电位。为了阐明纳米材料对哺乳动物早期胚胎细胞膜电位的影响及对卵母细胞结构的影响,本研究选用小鼠早期胚胎作为材料,建立了纳米材料对早期胚胎细胞膜电位改变研究模型。分析纳米银不同粒径、浓度,其它纳米材料(纳米金、纳米铜、纳米碳)的暴露对原核胚细胞膜电位的影响及纳米银对不同发育时期胚胎细胞膜电位的影响,以及纳米金、纳米银短期暴露对小鼠卵母细胞结构的影响,以确定纳米银、纳米金对早期胚胎细胞的毒性效应。本研究利用激光扫描共聚焦显微镜,通过Di BAC4(3)膜电位敏感荧光染料,对早期胚胎进行染色检测不同环境条件下胚胎细胞膜改变的情况,并利用透射电子显微镜和超薄切片技术研究纳米金和纳米银对卵母细胞结构的改变。观察分析得出,纳米银对原核期胚胎细胞膜电位产生即刻效应,即在很短的时间内(5 min)引起胚胎细胞去极化,膜电位升高,且其对胚胎细胞膜电位的影响与纳米银粒径呈负相关,与剂量呈正相关;纳米金、纳米铜和纳米碳在短时间内(30 min)均没有引起原核期胚胎细胞膜电位的改变;纳米银引起了不同的发育时期胚胎细胞膜电位的升高。对纳米金和纳米银暴露1 h的MⅡ期卵母细胞超薄切片的观察可得,纳米金处理组卵母细胞结构完整,对胞质内细胞器进行观察发现线粒体出现基质不均、局部电子密度增高的现象,嵴出现多处断裂、缺失,透明带和细胞质内可见纳米金颗粒;而纳米银处理1 h组卵母细胞结构完整,线粒体未见明显肿胀,但基质略微不均,嵴少量断裂,粗面内质网部分轻度扩张,胞质中可见纳米银颗粒;而纳米银处理3 h组中,线粒体损伤与1 h相较损伤加重,此时线粒体多数表现出基质不均和电子密度升高现象,内质网多数出现中度扩张;纳米金处理3 h组中损伤与1 h相似,表现为线粒体基质不均、局部电子密度升高。以上研究结果表明:纳米银具有引起原核胚胎细胞膜电位改变及其它发育时期胚胎细胞膜改变的能力,但其他纳米材料并没有引起原核期胚胎细胞膜电位改变,纳米银对早期胚胎细胞膜电位的改变与其粒径呈现负相关,与剂量大小呈正相关;在短期暴露时,纳米银对卵母细胞亚细胞结构的影响表现出时间效应,而纳米金对卵母细胞结构的影响没有随着暴露时间的延长而增加。
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