四种真菌多糖及其配方的体外抗氧化研究

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多糖(polysaccharide)是由10个以上的单糖通过糖苷键连接形成的含酮基或醛基的多羟基聚合物及其衍生物,它广泛分布于自然界,尤其存在于植物及微生物的细胞壁中。近年来随着人们对多糖类化合物的分离、纯化、结构分析和组分测定手段的进一步提高,对多糖类化合物的生物学功能有了新的认识,如多糖在细胞识别、细胞间物质运输、免疫调节及抗肿瘤等方面作用的研究引起了人们的广泛重视,其中从食用真菌中提取出的多糖,更表现出免疫调节和抗肿瘤的重要作用,从而为寻找抗肿瘤药物展示了良好的前景。随着人类生存环境的改变,营养模式的改变,医学模式和世界疾病谱的改变,单纯化学药物已经不能适应人们防病治病的需要,返璞归真,回归自然,崇尚天然药物和天然复合营养已成当代潮流,食物和天然药物的组合要素,一定是以一种严谨的复方或复合的状态存在。它们在自然界并非单独的个体,是有机的群体,这些分子彼此间交织成一个复杂的立体结构,镶嵌于复杂构造上的物质,包括蛋白质、维生素、矿物质等甚至成千上万种复杂的组合。它们应付千变万化的要求抗御“百病”和体现神奇的功能。甚至到目前生物科学还无法完全描述和明白它。如真菌中不仅有完整的、高含量和高质量的普通营养素,更重要的是有许多化学结构稳定、功能卓著的生理活性物质。这些活性物质结构复杂,种类繁多,功效不一,单β-多聚糖就有上百种,三萜类也上及百种,还有生物碱、腺苷类、维生素等。这些成份组成一个天然的“君臣佐使”之优型组合,起到了防治各种疾病的作用。食用菌多糖大多具有特殊活性,不同食用菌多糖其结构也不相同,对人体有不同的治疗和调理作用。这些多糖有很强的可嫁接活性,根据“君臣佐使”药理进行仿生态嫁接而成的多糖基因,具有更全面的辨证施治功效,即对症又对病,由表及里,对疾病进行全方位调理,直到康复。据文献报道:许多多糖单用虽有一定抗肿瘤效果,但两种免疫增强剂包括两种多糖合用疗效会更好,从理论上讲具有协同作用,其免疫增强及抗肿瘤作用会明显提高。复合多糖疗效之所以优于单味多糖,主要在于通过配伍发挥了药物间的相辅相成作用,可明显提高疗效。目前,有关复合多糖的协同作用研究已经引起学者们的兴趣。复合多糖的作用并非是单味多糖成分的简单相加,各成分间存在着相辅相成、相互为用的关系,其相加、协同或拮抗作用不容忽视。由于多糖经复合后会产生协同、相加或拮抗的相互作用而导致疗效提高或者降低,采用何种方式进行组合配伍在研制复合多糖中起着决定性的作用,这方面探索不仅是必要的,也是非常有价值的。因此本研究采用分离纯化的多糖,对体外氧自由基、羟自由基的清除为依据来验证多糖配伍复合原则的合理性与可行性,为应用于其它疾病治疗的复合多糖开发提供依据。目的本研究以体外抗氧化作用为依据,以功效及结构的相互协同互补为原则,对四种真菌多糖复合的最佳组合进行研究,为多糖应用提供复合多糖的配方。方法以桑黄、香菇、白桦茸、云芝真菌粗多糖为原料,用邻苯三酚水杨酸法和自氧化测定对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除率,以清除率为评判依据,采用L16(45)正交设计,进行复合配方研究,并对粗多糖的紫外吸收光谱及多糖含量的条件进行探讨。结果1、从桑黄、香菇、白桦茸、云芝真菌多糖紫外吸收光谱显示:最大吸收波长均在200~210nm和258~260nm,但吸收曲线的形状不同,不同多糖在相同的波长下的紫外吸收也不同。2、通过苯酚-硫酸法定量测定的条件实验显示,其最佳条件为:5%苯酚溶液1.6mL,浓硫酸6.5mL,加酸后水浴温度25℃,在1h内测量为宜;在0.0080-0.0640g/L的浓度范围内,糖浓度与紫外吸光度(吸收光波长为490nm)呈线性关系(r=0.9995);对标准品的测量值的相对平均偏差≤1.42%,对样品测量值的标准偏差S=0.66(n=4);平均加样回收率为98.01%,标准偏差S=2.17(n=4)。3、通过对桑黄、香菇、白桦茸、云芝真菌多糖粗提物的体外清除超氧阴离子自由基、羟自由基的测定结果显示:桑黄、香菇、白桦茸、云芝多糖在浓度为5.0g/L时,对羟自由基的体外清除率分别为46.40%、67.63%、58.68%、53.92%;在浓度为20g/L时,对羟自由基的体外清除率分别为70.18%、90.36%、93.12%、85.00%。4、通过桑黄、香菇、白桦茸、云芝真菌多糖体外抗氧化的L16(45)正交设计结果,确定了复合多糖的最佳配方为:4.66g/L桑黄多糖、6.64g/L香菇多糖、4.22g/L白桦茸多糖、8.09g/L云芝多糖组合。结论四种真菌多糖的最佳配方为:桑黄多糖4.66g/L、白桦茸多糖4.22g/L、云芝多糖8.09g/L、香菇多糖6.64g/L。在此组合下复合多糖对羟自由基的清除率达到最大,其最大清除率为75.63%。
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