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应用RT-PCR方法扩增A／PFV／Restock／34（H7N1）HA 1.7kb的HA基因，然后克隆到pMD-18T载体中，筛选到阳性重组子pMDH7HA，经酶切和PCR鉴定正确后，亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBac4.5／V5-His-TOPO的下游，随机筛选得到重组转移载体命名为pBHis-H7HA，经序列分析证明HA基因完整。与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染Sf9昆虫细胞，经三轮蚀斑纯化，获得重组杆状病毒rpH7HA。将重组杆状病毒在High Five细胞中表达，SDS-PAGE上有一63.7kD大小的泳带，正常细胞对照组无此条带，表明目的蛋白已表达。Western-blot实验结果显示表达H7HA蛋白在63.7 kD位置出现特异性阳性条带，说明所表达目的的蛋白有免疫学活性。 将目的蛋白定量后用弗氏完全佐剂乳化预制成禽流感H7HA基因工程亚单位疫苗。15只SPF鸡平均分三组：一次免疫组、加强免疫组和对照组。以20μg／羽剂量免疫三周龄一次免疫组、加强免疫组SPF鸡，两周后对加强免疫组进行二免：一免四周时（加强免疫组二免两周时）攻毒，结果表明一次免疫组对同源强毒攻击的保护率为40％，加强免疫组对同源强毒攻击的保护率为100％，对照组全部死亡。鸡攻毒后3天、5天和7天，分别取各组鸡的咽拭子，泄殖腔拭子进行病毒分离。结果显示加强免疫组鸡咽拭子、泄殖腔拭子均未检测到排毒，一次免疫组鸡有两只可以检测到，而对照组鸡攻毒后5天内全部死亡。分离实验表明该疫苗对禽流感有一定的保护力。本研究研制的H7亚型禽流感亚单位疫苗期待为我国的禽流感防制作出贡献。 我们使用10L转瓶对昆虫／杆状病毒表达系统大规模表达禽流感H7HA重组目的蛋白进行了的研究。结果表明：维持27.5℃，转速150rpm，添加10u／L的表面活性剂肝素钠，细胞接种密度2×105～3×105cell／ml可通过昆虫／杆状病毒表达系统在转瓶得到大量的具有生物学活性的目的蛋白。本实验可作为生产禽流感基因工程亚单位疫苗抗原的探索，并为下一步规模化生产奠定基础。