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目的本项目通过饲喂不同蛋氨酸水平饲粮杂交鸡血清对鸡下丘脑神经元细胞采食量相关基因表达影响的研究,探明饲粮蛋氨酸水平是否通过肌肉分泌细胞因子而调控下丘脑采食相关基因表达。方法1、126只22日龄杂交鸡(♂隐性白羽肉鸡×♀大骨鸡)公母各半,按2×3因子随机分成3个处理组,每个处理组3个重复。各处理组分别饲喂高(H组)、中(M组)、低(L组)3种水平蛋氨酸饲粮。准确记录每个重复组中鸡的体重、采食量。91日龄时每个重复组随机抽取公鸡母鸡各3只,取颈部全血分离血清。2、用全自动生化分析仪测定公鸡和母鸡血清的部分生化指标:总蛋白、白蛋白、尿酸、血糖、尿素、钙、白球比、淀粉酶、总胆红素和总二氧化碳。3、提取15~17胚龄鸡胚下丘脑组织,分离神经元,体外培养并鉴定神经元细胞。用各处理组的公、母鸡血清分别处理培养48h的下丘脑神经元细胞,处理后再继续培养24h。用Real-time PCR和Western Blot的方法检测下丘脑采食相关基因NPY、Ag RP、GABAA-ɑ1、MC4R和POMC的m RNA和蛋白表达量。结果1、不同饲粮蛋氨酸水平对29~91日龄鸡ADFI有显著影响。公鸡H组ADFI显著低于M组和L组(P<0.01),M组与L组ADFI无显著差异(P>0.05);母鸡L组ADFI显著高于H组(P<0.01)和M组(P<0.05)。2、各处理组91日龄鸡血清的总蛋白、白蛋白、尿酸、血糖、尿素、钙、白球比、淀粉酶、总胆红素和总二氧化碳无显著差异(P>0.05)。3、不同饲粮蛋氨酸水平处理的鸡血清显著影响NPY m RNA、Ag RP m RNA、GABAA-α1 m RNA的表达(P<0.01)。其中L组NPY m RNA、Ag RP m RNA、GABAA-α1 m RNA均显著高于H组和M组(P<0.01),H组和M组之间无显著性差异(P>0.05)。饲粮蛋氨酸水平处理的鸡血清对MC4R m RNA、POMC m RNA无显著性影响(P>0.05)。母鸡血清处理的NPY m RNA、Ag RP m RNA、GABAA-α1m RNA显著高于公鸡血清处理(P<0.05)。不同性别鸡血清对NPY m RNA、Ag RP m RNA、GABAA-α1 m RNA影响显著(P<0.05),不同饲粮蛋氨酸水平处理的鸡血清和性别之间有显著的交互作用(P<0.05)。4、饲粮蛋氨酸水平处理的鸡血清显著影响NPY、Ag RP、GABAA-α1蛋白表达(P<0.05)。L组血清处理的NPY、Ag RP、GABAA-α1蛋白显著或极显著高于H组和M组(P<0.01),各处理组MC4R和POMC蛋白差异不显著(P>0.05)。公鸡血清和母鸡血清处理间差异不显著(P>0.05)。饲粮蛋氨酸水平处理的鸡血清极显著影响NPY、Ag RP蛋白(P<0.01),显著影响GABAA-α1蛋白(P<0.05),对MC4R和POMC蛋白无显著影响(P>0.05)。性别对NPY、Ag RP、GABAA-α1、MC4R和POMC蛋白无显著影响(P>0.05),饲粮蛋氨酸水平和性别之间无交互作用(P>0.05)。结论1、饲粮蛋氨酸水平显著影响鸡采食量,低水平饲粮蛋氨酸更有利于提高29~91日龄鸡的采食量。2、饲粮蛋氨酸水平对91日龄鸡血清的常规生化指标无显著影响。3、不同蛋氨酸水平饲粮饲喂的鸡血清对下丘脑神经元细胞NPY、Ag RP、GABAA-ɑ1基因m RNA的表达有显著影响,对MC4R、POMC基因m RNA表达无显著影响。其中NPY、Ag RP、GABAA-ɑ1基因m RNA的表达水平母鸡血清处理显著高于公鸡血清处理,不同饲粮蛋氨酸水平处理的鸡血清和性别之间有显著的交互作用。4、不同蛋氨酸水平饲粮饲喂的鸡血清对下丘脑神经元细胞NPY、Ag RP、GABAA-ɑ1蛋白的表达有显著影响,对MC4R、POMC蛋白表达无显著影响。公鸡血清和母鸡血清处理间差异不显著,性别对NPY、Ag RP、GABAA-α1、MC4R和POMC蛋白无显著影响,饲粮蛋氨酸水平和性别之间无交互作用。