Duffy抗原趋化因子受体(DARC)抑制人乳腺癌细胞的生长和肺转移

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目的:探讨Duffy抗原趋化因子受体(DARC)对人乳腺癌细胞成瘤性和转移的影响及其作用机制。方法:采用RT-PCR和western blot方法检测不同的人乳腺癌细胞系DARC的表达,对DARC低表达的细胞进行DARC cDNA的稳定转染,以构建DARC稳定过表达的MDA-MB-231细胞(MDA-MB-231-DARC)和MDA-MB-435肺高转移潜能细胞株(MDA-MB-435HM-DARC)。体外实验中,观察DARC过表达对细胞生物学行为的影响;分别在基因水平和蛋白质水平检测DARC的配体CXCL8(IL-8)和CCL2(MCP-1,JE)浓度的变化;体内实验中,首先建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,观察移植瘤生长曲线和肺表面转移灶,ELISA方法检测CCL2浓度的变化,RT-PCR和western blot方法检测瘤内MMP-9浓度的改变,免疫组化方法标记移植瘤内新生血管(CD34),计数MVD:随机挑选复旦大学附属肿瘤医院病理科1993~1995年间,经病理确诊的乳腺癌临床组织标本75例,平均年龄(50.19±12.53),按淋巴结转移阳性和阴性分为两组,通过免疫组化技术检测DARC和CD34表达,并对DARC的表达与MVD,ER表达状况及生存率的相关性进行分析。结果:转染了DARC质粒后的MDA-MB-231-DARC和MDA-MB-435HM-DARC细胞的培养上清和裸鼠移植瘤组织中,DARC配体的浓度显著降低。在体外实验中,未观察到细胞增殖及侵袭能力的明显改变,但体内实验结果显示,MDA-MB-231-DARC和MDA-MB-435HM-DARC移植瘤出现的时间明显晚于对照组,生长速度比对照组明显缓慢,且肿瘤体积明显小于对照组;肺表面转移灶数目明显少于转染空质粒组和未转染组;瘤内微血管密度(MVD)、MMP-9表达明显降低;在人乳腺癌临床组织标本中,DARC的高表达与淋巴结转移阴性显著相关,和微血管密度(MVD)以及肿瘤的远处转移分别呈负相关。生存分析结果显示,DARC的高表达与病人的生存时间延长显著相关。结论:DARC作为促血管生成性趋化因子的清除槽,可捕捉和清除成血管性趋化因子,抑制肿瘤的血管生成,从而抑制乳腺癌的生长和转移。
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