【摘 要】
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多胺是普遍存在于生物体内的一类重要的生物小分子,参与细胞的生长和分化等重要的生理过程,也是肿瘤细胞快速生长所必需。在多胺合成代谢途径中的第一个限速酶是鸟氨酸脱羧酶
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多胺是普遍存在于生物体内的一类重要的生物小分子,参与细胞的生长和分化等重要的生理过程,也是肿瘤细胞快速生长所必需。在多胺合成代谢途径中的第一个限速酶是鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase, ODC). ODC在体内的表达水平受它的终极产物的负反馈调节。ODC和抗酶蛋白(antizyme, OAZ)结合也可以引起自身降解。ODC跟OAZ都可以参与细胞生长与分化、基因表达调控、胚胎发育等重要生理过程,也是抗肿瘤治疗的潜在分子靶点。已有研究得到了人和小鼠的ODC的晶体结构,也有研究者得到了OAZ的核磁共振结构。为获得ODC和OAZ复合物的晶体结构,本研究分别对人源和酵母源的ODC和OAZ在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,并采用亲和层析、凝胶过滤层析进行纯化,利用蛋白互作的方法获得状态稳定均一、纯度高、适于结晶的蛋白。人源ODC和OAZ复合物蛋白使用坐滴气相扩散法进行结晶条件筛选,优化并获得了两种不同结晶条件下的晶体。本研究同时克隆了OAZ发挥功能的区域OAZ-ORF2,经过蛋白表达纯化,与ODC互作形成复合物,进行晶体筛选,最终经过x射线衍射得到了分辨率比较高(3A左右)的衍射数据。本研究为进一步研究两者复合物的晶体学结构具有积极推动作用。
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