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目的:基于课题组前期基础研究,本课题从AKT/EGF信号通路进一步探讨MEBT/MEBO促进慢性难愈合创面修复的机制方法:健康成年SPF级Wistar雄性大鼠60只,12周龄,体重220g~250g,适应性喂养1周后,按数字表法随机分为:空白组、急性全层皮肤缺损组(对照组)、模型组、美宝组(Moist Exposed Burn Ointiment Group,MEBO组)和贝复新组各12只。空白组大鼠不作任何有损伤性处理;对照组大鼠在造模部位行全层皮肤切除,但不注射氢化可的松;模型组、美宝组和贝复新组大鼠在造模部位行全层皮肤切除后腹腔注射氢化可的松,模型组大鼠只敷生理盐水,美宝组大鼠敷美宝湿润烧伤膏,贝复新组大鼠敷贝复新进行治疗。各组创面制备后立即用药治疗。在造模后第3天、第7天、第14天每组各处死4只,取新鲜创面组织,立即放于液氮罐中,并在取材完毕后迅速转入-80℃超低温冰箱。待标本全部收集完成后进行病理检测,用Western Blotting、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR方法检测AKT、EGF、MMP-2的蛋白及基因表达。结果:(1)创面大体情况及光镜观察:对照组创面恢复最好,愈合时间最短,MEBO组、贝复新组愈合情况显著优于模型组(2)Western Blotting:(1)MEBO组、贝复新组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中MMP-2表达量都呈现升高-降低的趋势(P<0.01);模型组则显示呈递增趋势(P<0.01);MEBO组、贝复新组、对照组和模型组各组三个时相点的MMP-2表达量均有显著差异(P<0.01);空白组大鼠由于未做有损伤处理,其组织乃正常皮肤,故MMP-2表达量未有明显变化(P>0.05)。(2)MEBO组、贝复新组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中EGFR表达量都呈现出升高-降低的趋势(P<0.01);模型组则显示呈递增趋势(P<0.01);MEBO组、贝复新组、对照组和模型组各组三个时相点的EGFR表达量均有显著差异(P<0.01);空白组大鼠由于未做有损伤处理,其组织乃正常皮肤,故EGFR表达量未有明显变化(P>0.05)。(3)MEBO组、贝复新组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中p-AKT表达量都呈现出升高-降低的趋势(P<0.01);模型组则显示呈递增趋势(P<0.01);MEBO组各组三个时相点的p-AKT表达量均有显著差异(P<0.01),空白组大鼠由于未做有损伤处理,其组织乃正常皮肤,故p-AKT表达量未有明显变化(P>0.05)。(3)RT-PCR:(1)MEBO组、贝复新组、对照组和模型的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中MMP-2转录水平都呈现升高-降低的趋势(P<0.01);MEBO组、贝复新组、对照组和模型组各组三个时相点的MMP-2转录水平均有显著差异(P<0.01);空白组大鼠由于未做有损伤处理,其组织乃正常皮肤,故MMP-2转录水平未有明显变化(P>0.05)。(2)MEBO组、贝复新组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中EGFR转录水平都呈现出升高-降低的趋势(P<0.01);模型组则显示呈递增趋势(P<0.01);MEBO组、贝复新组、对照组和模型组各组三个时相点的EGFR转录水平均有显著差异(P<0.01);空白组大鼠由于未做有损伤处理,其组织乃正常皮肤,故EGFR转录水平未有明显变化(P>0.05)。(3)MEBO组、贝复新组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中AKT转录水平都呈现出升高-降低的趋势(P<0.01);模型组则显示呈递增趋势(P<0.01);MEBO组、贝复新组和对照组各组三个时相点的AKT转录水平均有显著差异(P<0.01);空白组大鼠由于未做有损伤处理,其组织乃正常皮肤,AKT转录水平未有明显变化。结论:(1)MEBO能促进大鼠慢性难愈合创面的愈合。(2)MEBO能降低慢性难愈合创面肉芽组织中MMP-2蛋白及mRNA的表达水平。(3)MEBO能升高慢性难愈合创面肉芽组织中p-AKT、EGFR蛋白的表达及AKT mRNA、EGFRmRNA的转录水平。(4)MEBO可能通过激活AKT信号通路,增加EGFR的表达来促进创面血管生成,同时下调MMP-2的表达,延缓细胞基质降解,促进创面愈合。