【摘 要】
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目的 建立抗Fas抗体诱导大鼠终板软骨细胞凋亡模型,检测胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)是否有延缓软骨细胞凋亡的作用,并进一步了解软骨细胞中整合
【机 构】
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上海中医药大学附属龙华医院脊柱病研究所,香港大学医学院骨科学系
【基金项目】
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国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;上海市重点学科建设项目;上海市科技曙光学者计划;上海市重点学科建设项目
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目的 建立抗Fas抗体诱导大鼠终板软骨细胞凋亡模型,检测胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)是否有延缓软骨细胞凋亡的作用,并进一步了解软骨细胞中整合素β1和黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达情况.方法 取大鼠颈椎软骨终板软骨细胞行体外培养,应用抗Fas抗体(500 ng/ml)和人重组IGF-1(50 ng/ml)处理.光学显微镜观察细胞形态,透射电子显微镜、TUNEL法观察软骨细胞凋亡形态,免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2表达,实时荧光定量聚合酶链反应、免疫细胞化学和Western blot法检测整合素β1和FAK的基因与蛋白表达.结果 体外培养出软骨细胞并维持其表型.抗Fas抗体诱导软骨细胞发生凋亡,TUNEL染色证明软骨细胞凋亡率升高,透射电镜检查发现典型凋亡小体.与正常组比较,诱导凋亡组Bcl-2表达降低而Bax表达升高,整合素β1和FAK的基因与蛋白表达明显下调;抗Fas抗体与IGF-1联合干预后,Bcl-2表达升高而Bax表达降低,整合素β1和FAK的基因与蛋白表达明显上调.结论 抗Fas抗体可诱导体外培养的终板软骨细胞凋亡,抗Fas抗体与IGF-1联合应用,能延缓软骨细胞凋亡的过程,维持软骨细胞的功能.
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