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【摘 要】目的：探讨NF-kB、VEGF-C及VEGFR-3在乳腺癌中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学法检测NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3在78例乳腺癌中的表达情况。结果：在78例乳腺癌中NF-kB阳性表达率61.53%；VEGF-C阳性表达率62.82%；VEGFR-3阳性表达率70.51%。NF-kB、VEGF-C、VEGFR-3三者的表达均与乳腺癌的组织学分级，TNM分期以及淋巴结转移相关（P<0.05），而与病人的年龄和肿瘤的大小无关（P>0.05）。结论：NF-kB和VEGF-C，VEGF-C和VEGFR-3均正相关（r值分别为0.264和0.259）。
【关键词】乳腺癌； NF-kB； VEGF-C； VEGFR-3
【中图分类号】R735.3+7 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）04-2070-02
乳腺癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，在女性常见肿瘤中位于首位[1]。乳腺癌的发生及发展严重危害了女性健康。乳腺癌早期特别容易发生淋巴道的转移，而一旦发生了淋巴道转移将对患者的预后产生不利影响。故本实验采用免疫组织化学法检测NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3在乳腺癌中的表达情况，探讨它们在乳腺癌的发生和恶性进展中的作用，以及它们三者之间的相关性。
1 材料与方法
1.1 材料
收集河北联合大学附属医院病理科2012年1月至2013年5月期间手术切除的蜡块存档标本78例，其中伴有腋窝淋巴结转移者40例。患者均为女性，年龄32-72岁，平均年龄52岁，术前均未接受任何辅助治疗，病理诊断明确。
1.2 方法
1.2.1 免疫组织化学染色
NF-kB、VEGF-C、VEGFR-3均为鼠抗人单克隆抗体，染色方法为免疫组化SP法，按试剂盒的说明书进行操作，抗原修复均采用高压锅进行热修复，然后DAB显色，复染，脱水，透明，封片。PBS代替一抗作阴性对照。
1.2.2 结果判定
阳性率：每张切片选取5个高倍视野，每个高倍视野下随机计数100个细胞，NF-kB以胞浆及胞核出现棕黄色颗粒为阳性，见图1；VEGF-C以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，见图2。结果判断标准[2]：着色细胞<10%为阴性，≥10%为阳性。着色细胞为10%～25%为（+）；25%～50%为（++）；>50%者为强阳性（+++）。
VEGFR-3表达于淋巴管内皮细胞，见图3，阳性脉管数判断标准及记数方法[3]：低倍镜下找VEGFR-3阳性脉管密集区， 100倍视野计数10个热区中VEGFR-3（ + ）脉管数， 取平均值。肿瘤区内单个或成丛的内皮细胞， 不管是否成腔均视为脉管并计数。计算出阳性表达的細胞所占的百分比。
1.3 统计学方法 数据资料经SPSS 17.0统计软件处理，采用χ2检验，四格表进行统计学分析，相关关系采用Spearman检验方法，以P<0.05判为具有统计学意义。
2 结果
2.1 NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3在乳腺癌中的表达及与临床病理指标之间的关系
在78例乳腺癌中，NF-kB阳性表达率为61.53%；VEGF-C阳性表达率为62.82%；VEGFR-3阳性表达率为70.51%。NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3均与乳腺癌的组织学分级，TNM分期以及有无淋巴及转移密切相关（P<0.05），；三者的表达与病人的年龄和肿瘤的大小无关（P>0.05），差异不具有统计学意义。见表1。
2.2 NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3在乳腺癌中表达的相关性
在78例乳腺癌中NF-kB与VEGF-C的表达呈正相关（r=0.264）；VEGF-C和VEGFR-3的表达也呈正相关（r=0.259）。
3 讨论
NF-kB是核转录因子家族的成员之一，该家族成员须相互之间形成同源或异源二聚体才具有生物学活性。在静息状态下，NF-kB同源或异源二聚体与其抑制物IkB结合存在于胞质中，此时不具有生物学活性，当受到外源性刺激时，NF-kB从胞浆移位至胞核中才能发挥其作用[4]。本实验发现在乳腺癌中NF-kB蛋白的表达与其组织学分级、TNM分期、淋巴结转移情况均明显相关，与病人的年龄及肿瘤的大小无关。这与相关文献报道一致。
VEGF-C是血管内皮生长因子家族的新成员，VEGFR-3是其受体，主要位于淋巴管内皮细胞。VEGF-C可以与VEGFR-3特异性结合，发挥调节淋巴管生理功能的作用。本实验研究表明，VEGF-C随乳腺癌的TNM分期，组织学分级的增高而表达增高；实验还发现VEGF-C在淋巴结转移组和无淋巴结转移组的阳性表达率分别为77.50%和47.36%，差异具有统计学意义（P<0.05），与VEGF-C关系密切的VEGFR-3在乳腺癌中的表达也表现出类似现象。这些结果提示VEGF-C与VEGFR-3结合可以促进淋巴管的增生，并参与乳腺癌的淋巴结转移过程。
有研究认为[5]，在乳腺癌中NF-kB的异常活化可能上调VEGF-C的表达，然后VEGF-C与其受体VEGFR-3结合，促进肿瘤周围淋巴管的新生以及淋巴管的转移。本实验分析了NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3三者之间的相关性，发现NF-kB和VEGF-C，VEGF-C和VEGFR-3之间均呈正相关，进一步证实了它们三者对乳腺癌的发生、发展起着重要的调节作用。尽管VEGF-C/VEGFR-3系统的作用机制尚未完全阐明，但这些研究结果提示，如应用相应的抑制剂阻断VEGF-C与VEGFR-3的结合，则有可能抑制肿瘤的淋巴道转移，从而改善肿瘤患者的预后。
参考文献
[1] Ferlay J，Shin HR，Bray F，et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008：Globocan 2008 [J].International Journal of Cancer，2010，127（12）： 2893-2917.
[2] 张素贞，张凡，常永霞，等. 淋巴归巢受体P选择素、CD44、α6β1在颈癌中表达与淋巴转移关系研究.中国老年学杂志[J]. 2010，1： 16-18.
[3] 邢光明， 曲明阳，张桂平， 等. 胃癌组织内血管内皮生长因子C表达与血管和淋巴管生成及淋巴转移的关系[J]. 中华普通外科杂志，2004，19（6）： 361-363.
[4] Samant R S， Clark D W， Fillmore R A， et al. Breast cancer metastasis suppressor 1 （BRMS1）inhibits osteopontin transcription by abrogating NF-kappaB activation[J]. Mol Cancer， 2007， 6（6）： 2007-1.
[5] Saharinen P， Petrova TV. Molecular regulation of lymphangiogenesis[J]. Annals of the New York Academy of Sciences， 2004， 1014（1）： 76-87.
通讯作者：
张素华（1954-），女，汉族，教授，硕士生导师，e-mail： [email protected]。
【关键词】乳腺癌； NF-kB； VEGF-C； VEGFR-3
【中图分类号】R735.3+7 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）04-2070-02
乳腺癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，在女性常见肿瘤中位于首位[1]。乳腺癌的发生及发展严重危害了女性健康。乳腺癌早期特别容易发生淋巴道的转移，而一旦发生了淋巴道转移将对患者的预后产生不利影响。故本实验采用免疫组织化学法检测NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3在乳腺癌中的表达情况，探讨它们在乳腺癌的发生和恶性进展中的作用，以及它们三者之间的相关性。
1 材料与方法
1.1 材料
收集河北联合大学附属医院病理科2012年1月至2013年5月期间手术切除的蜡块存档标本78例，其中伴有腋窝淋巴结转移者40例。患者均为女性，年龄32-72岁，平均年龄52岁，术前均未接受任何辅助治疗，病理诊断明确。
1.2 方法
1.2.1 免疫组织化学染色
NF-kB、VEGF-C、VEGFR-3均为鼠抗人单克隆抗体，染色方法为免疫组化SP法，按试剂盒的说明书进行操作，抗原修复均采用高压锅进行热修复，然后DAB显色，复染，脱水，透明，封片。PBS代替一抗作阴性对照。
1.2.2 结果判定
阳性率：每张切片选取5个高倍视野，每个高倍视野下随机计数100个细胞，NF-kB以胞浆及胞核出现棕黄色颗粒为阳性，见图1；VEGF-C以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，见图2。结果判断标准[2]：着色细胞<10%为阴性，≥10%为阳性。着色细胞为10%～25%为（+）；25%～50%为（++）；>50%者为强阳性（+++）。
VEGFR-3表达于淋巴管内皮细胞，见图3，阳性脉管数判断标准及记数方法[3]：低倍镜下找VEGFR-3阳性脉管密集区， 100倍视野计数10个热区中VEGFR-3（ + ）脉管数， 取平均值。肿瘤区内单个或成丛的内皮细胞， 不管是否成腔均视为脉管并计数。计算出阳性表达的細胞所占的百分比。
1.3 统计学方法 数据资料经SPSS 17.0统计软件处理，采用χ2检验，四格表进行统计学分析，相关关系采用Spearman检验方法，以P<0.05判为具有统计学意义。
2 结果
2.1 NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3在乳腺癌中的表达及与临床病理指标之间的关系
在78例乳腺癌中，NF-kB阳性表达率为61.53%；VEGF-C阳性表达率为62.82%；VEGFR-3阳性表达率为70.51%。NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3均与乳腺癌的组织学分级，TNM分期以及有无淋巴及转移密切相关（P<0.05），；三者的表达与病人的年龄和肿瘤的大小无关（P>0.05），差异不具有统计学意义。见表1。
2.2 NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3在乳腺癌中表达的相关性
在78例乳腺癌中NF-kB与VEGF-C的表达呈正相关（r=0.264）；VEGF-C和VEGFR-3的表达也呈正相关（r=0.259）。
3 讨论
NF-kB是核转录因子家族的成员之一，该家族成员须相互之间形成同源或异源二聚体才具有生物学活性。在静息状态下，NF-kB同源或异源二聚体与其抑制物IkB结合存在于胞质中，此时不具有生物学活性，当受到外源性刺激时，NF-kB从胞浆移位至胞核中才能发挥其作用[4]。本实验发现在乳腺癌中NF-kB蛋白的表达与其组织学分级、TNM分期、淋巴结转移情况均明显相关，与病人的年龄及肿瘤的大小无关。这与相关文献报道一致。
VEGF-C是血管内皮生长因子家族的新成员，VEGFR-3是其受体，主要位于淋巴管内皮细胞。VEGF-C可以与VEGFR-3特异性结合，发挥调节淋巴管生理功能的作用。本实验研究表明，VEGF-C随乳腺癌的TNM分期，组织学分级的增高而表达增高；实验还发现VEGF-C在淋巴结转移组和无淋巴结转移组的阳性表达率分别为77.50%和47.36%，差异具有统计学意义（P<0.05），与VEGF-C关系密切的VEGFR-3在乳腺癌中的表达也表现出类似现象。这些结果提示VEGF-C与VEGFR-3结合可以促进淋巴管的增生，并参与乳腺癌的淋巴结转移过程。
有研究认为[5]，在乳腺癌中NF-kB的异常活化可能上调VEGF-C的表达，然后VEGF-C与其受体VEGFR-3结合，促进肿瘤周围淋巴管的新生以及淋巴管的转移。本实验分析了NF-kB、VEGF-C和VEGFR-3三者之间的相关性，发现NF-kB和VEGF-C，VEGF-C和VEGFR-3之间均呈正相关，进一步证实了它们三者对乳腺癌的发生、发展起着重要的调节作用。尽管VEGF-C/VEGFR-3系统的作用机制尚未完全阐明，但这些研究结果提示，如应用相应的抑制剂阻断VEGF-C与VEGFR-3的结合，则有可能抑制肿瘤的淋巴道转移，从而改善肿瘤患者的预后。
参考文献
[1] Ferlay J，Shin HR，Bray F，et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008：Globocan 2008 [J].International Journal of Cancer，2010，127（12）： 2893-2917.
[2] 张素贞，张凡，常永霞，等. 淋巴归巢受体P选择素、CD44、α6β1在颈癌中表达与淋巴转移关系研究.中国老年学杂志[J]. 2010，1： 16-18.
[3] 邢光明， 曲明阳，张桂平， 等. 胃癌组织内血管内皮生长因子C表达与血管和淋巴管生成及淋巴转移的关系[J]. 中华普通外科杂志，2004，19（6）： 361-363.
[4] Samant R S， Clark D W， Fillmore R A， et al. Breast cancer metastasis suppressor 1 （BRMS1）inhibits osteopontin transcription by abrogating NF-kappaB activation[J]. Mol Cancer， 2007， 6（6）： 2007-1.
[5] Saharinen P， Petrova TV. Molecular regulation of lymphangiogenesis[J]. Annals of the New York Academy of Sciences， 2004， 1014（1）： 76-87.
通讯作者：
张素华（1954-），女，汉族，教授，硕士生导师，e-mail： [email protected]。