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摘要：且的，建立中药(青丝线草)中多糖的含量测定方法。方法，采用苯酚一硫酸比色法。结果，测得含量为13.74％，精密度及重复性良好，回收率为99 35％.RSD为1.3％。结论，此方法操作简便，准确性好，为中药(青丝线草)的质量控制提供了一个定量方法和参考依据。
关键词：青丝线草 多糖 检测
0 引言
为了检测中药的药效，现以青丝线草为例对其含糖量做以检测。青丝线草为爵床科Acanthacea枪刀药属植物枪刀药Hypoestes purple(L.)Soland的全草。枪刀药属植物中国产3种，均可药用，分布于中国台湾、广东、广西。味甘淡，性微寒。功能清热解毒，消炎，消肿散淤，凉血止血，健脾，止咳，生津止渴。用于治疗支气管炎、肺结核咳血、咳嗽、消渴、糖尿病、刀伤出血、跌打肿痛。据文献报道，青丝线草中主要含有氨基酸、生物碱、酚类、糖类等。现代药理研究证明，多糖物质及其衍生物具有药用价值，尤其在抗凝、抗血栓、调血脂、调节免疫功能和抗肿瘤、抗放射方面均有显著的药理作用与疗效。多糖类中药常作为有效的免疫调节剂，能明显调节T，B，CTL，NK和Mφ等细胞功能；促进1g类抗体含量提高，促进IL-2产生和IL-2L的表达，诱导IL-6和TNF的产生。青丝线草中多糖的含量，作为评价该草药质量的指标之一。
1 仪器与材料
1.1仪器WFH-207B三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司)；SB-5200超声波提取器(上海新芝生物技术研究所)；AB204-N电子分析天平(梅特勒一托利多仪器有限公司)；TDA-8002型恒温水浴箱(余姚工业仪器二厂)。
1.2试剂无水葡萄糖(批号：0403251，广州新成化工厂，AR级)，其余化学试剂均为国产AR级。
1.3样品青丝线草产自广东江门地区，为爵床科枪刀药属植物枪刀药Hvpoestes purpurea(L.)Soland的全草。
2 方法与结果
2.1青丝线草多糖的提取与精制称取青丝线草粗粉50g，置圆底烧瓶中，加石油醚(60～90℃)400ml，浸泡2h，回流提取1h，滤过，滤渣挥干溶媒，以80％乙醇400ml回流提取2次；1h／次，滤过，滤渣置圆底烧瓶中，加蒸馏水600ml浸泡1h后回流提取1h，滤过，再加蒸馏水400ml回流提取1h，滤过，滤液合并，浓缩至200ml，Sevage法除蛋白后加95％乙醇使含醇80％，静置过夜，抽滤，滤渣以无水乙醇、丙酮依次洗涤多次，得精制多糖，60℃烘干备用。
2.2苯酚试液的配制取苯酚100g，加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g，蒸馏，收集182℃馏分。称取5g，加水溶解，定容于100ml棕色容量瓶(临用前新配)。
2.3测定波长的选择精密吸取0.02mo1／ml葡萄糖溶液2.0ml,置15ml具塞试管中，加苯酚试剂1.0ml混匀，加浓硫酸5.0ml，混匀，放置15min，置40℃水浴中加热10min.取出放置15min，以蒸馏水同法操作为空白，在460～510nm测定吸收度，确定最大吸收波长为488nm。
2.4标准曲线的制备精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖505.6mg，置50ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准液贮备液。取此贮备液分别稀释为0.005 056，0.010 112，0.020 224，0.040 448，0.050 560 mg／ml的5个不同浓度的对照品溶液。精密吸取溶液各2.0ml置10ml具塞试管中，加苯酚试剂1.0ml混匀，再迅速加人浓硫酸5.0ml混匀，放置15min后置40℃水浴中加热10min，取出放置15min，以相应试剂为空白，照分光光度法在488nm处测定吸收度。求得标准曲线回归方程：A=12.975C+0.012，r=0.9998(n=5)。样品在0.005～0.05 mg／ml的范围内线性良好。
2.5换算因素的测定取60℃干燥至恒重的精制青丝线草多糖约10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取该溶液2.0ml，照标准曲线制各项下方法，自“加苯酚试剂1.0ml起，依法测定吸收度，按下式计算换算因素：f=Cs／C(Cs为多糖液浓度，C为多糖液中葡萄糖浓度)，计算得f=3.930
2.6稳定性实验取样品溶液、标准品溶液及精制多糖溶液各2.0ml，照标准曲线制备项下方法，自“加苯酚试剂1.0ml，”起，依法测定吸收度，并分别于0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，60min测定，结果表明样品液至少在1h内稳定性良好。
2.7精密度实验取样品约0.2g，精密称定，按样品测定项下操作，测吸收度，结果RSD=0.82％(n=6)。
2.8重复性实验取药材粉末6份，精密称定，按样品测定项下操作，测吸收度，计算得RSD=0.75％(n=6)。结果表明该方法具有较好的重复性。
2.9回收率实验取药材粉末6份，每份约0.1g，精密称定，精密加入精制多糖约13mg，按样品测定项下操作，测吸收度。
回收率(％)=(测得量－样品中多糖含量)／多糖加入量×100％
2.10样品测定取样品粉末约0.2g，精密称定，加80％乙醇100ml，超声振荡提取20min，过滤，药渣用热80％乙醇洗涤，挥干乙醇后加蒸馏水100ml超声振荡提取20min，过滤，滤渣再加80ml蒸馏水超声振荡提取20min，过滤，残渣用热水洗涤，洗液并入提取液，待冷后转移于250ml容量瓶，加蒸馏水稀释至刻度，精密吸取2.0ml，置10ml具塞试管中，按“标准曲线”项下方法自“加苯酚试剂1.0ml”起，依法操作，测得吸收度，计算样品中多糖含量。
3 讨论
本文利用苯酚一硫酸法测定了青丝线草的主要活性成分一多糖，作为评价该草药质量的指标之一。此项实验研究为首次报道，本文对青丝线草的主要化学成分的研究结果为开拓新药源提供了新的科学用药依据。多糖含量的测定有多种方法，本文选用苯酚一硫酸法，生成橙黄色溶液，在488nm处有特征吸收。此方法方便简单，最为常用，但需严格控制水解条件，否则误差较大。本实验方法操作简单，所用仪器简单，消耗成本低，在缺乏先进检测仪器的基层单位，实为一种可靠、简单的检测方法。
关键词：青丝线草 多糖 检测
0 引言
为了检测中药的药效，现以青丝线草为例对其含糖量做以检测。青丝线草为爵床科Acanthacea枪刀药属植物枪刀药Hypoestes purple(L.)Soland的全草。枪刀药属植物中国产3种，均可药用，分布于中国台湾、广东、广西。味甘淡，性微寒。功能清热解毒，消炎，消肿散淤，凉血止血，健脾，止咳，生津止渴。用于治疗支气管炎、肺结核咳血、咳嗽、消渴、糖尿病、刀伤出血、跌打肿痛。据文献报道，青丝线草中主要含有氨基酸、生物碱、酚类、糖类等。现代药理研究证明，多糖物质及其衍生物具有药用价值，尤其在抗凝、抗血栓、调血脂、调节免疫功能和抗肿瘤、抗放射方面均有显著的药理作用与疗效。多糖类中药常作为有效的免疫调节剂，能明显调节T，B，CTL，NK和Mφ等细胞功能；促进1g类抗体含量提高，促进IL-2产生和IL-2L的表达，诱导IL-6和TNF的产生。青丝线草中多糖的含量，作为评价该草药质量的指标之一。
1 仪器与材料
1.1仪器WFH-207B三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司)；SB-5200超声波提取器(上海新芝生物技术研究所)；AB204-N电子分析天平(梅特勒一托利多仪器有限公司)；TDA-8002型恒温水浴箱(余姚工业仪器二厂)。
1.2试剂无水葡萄糖(批号：0403251，广州新成化工厂，AR级)，其余化学试剂均为国产AR级。
1.3样品青丝线草产自广东江门地区，为爵床科枪刀药属植物枪刀药Hvpoestes purpurea(L.)Soland的全草。
2 方法与结果
2.1青丝线草多糖的提取与精制称取青丝线草粗粉50g，置圆底烧瓶中，加石油醚(60～90℃)400ml，浸泡2h，回流提取1h，滤过，滤渣挥干溶媒，以80％乙醇400ml回流提取2次；1h／次，滤过，滤渣置圆底烧瓶中，加蒸馏水600ml浸泡1h后回流提取1h，滤过，再加蒸馏水400ml回流提取1h，滤过，滤液合并，浓缩至200ml，Sevage法除蛋白后加95％乙醇使含醇80％，静置过夜，抽滤，滤渣以无水乙醇、丙酮依次洗涤多次，得精制多糖，60℃烘干备用。
2.2苯酚试液的配制取苯酚100g，加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g，蒸馏，收集182℃馏分。称取5g，加水溶解，定容于100ml棕色容量瓶(临用前新配)。
2.3测定波长的选择精密吸取0.02mo1／ml葡萄糖溶液2.0ml,置15ml具塞试管中，加苯酚试剂1.0ml混匀，加浓硫酸5.0ml，混匀，放置15min，置40℃水浴中加热10min.取出放置15min，以蒸馏水同法操作为空白，在460～510nm测定吸收度，确定最大吸收波长为488nm。
2.4标准曲线的制备精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖505.6mg，置50ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准液贮备液。取此贮备液分别稀释为0.005 056，0.010 112，0.020 224，0.040 448，0.050 560 mg／ml的5个不同浓度的对照品溶液。精密吸取溶液各2.0ml置10ml具塞试管中，加苯酚试剂1.0ml混匀，再迅速加人浓硫酸5.0ml混匀，放置15min后置40℃水浴中加热10min，取出放置15min，以相应试剂为空白，照分光光度法在488nm处测定吸收度。求得标准曲线回归方程：A=12.975C+0.012，r=0.9998(n=5)。样品在0.005～0.05 mg／ml的范围内线性良好。
2.5换算因素的测定取60℃干燥至恒重的精制青丝线草多糖约10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取该溶液2.0ml，照标准曲线制各项下方法，自“加苯酚试剂1.0ml起，依法测定吸收度，按下式计算换算因素：f=Cs／C(Cs为多糖液浓度，C为多糖液中葡萄糖浓度)，计算得f=3.930
2.6稳定性实验取样品溶液、标准品溶液及精制多糖溶液各2.0ml，照标准曲线制备项下方法，自“加苯酚试剂1.0ml，”起，依法测定吸收度，并分别于0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，60min测定，结果表明样品液至少在1h内稳定性良好。
2.7精密度实验取样品约0.2g，精密称定，按样品测定项下操作，测吸收度，结果RSD=0.82％(n=6)。
2.8重复性实验取药材粉末6份，精密称定，按样品测定项下操作，测吸收度，计算得RSD=0.75％(n=6)。结果表明该方法具有较好的重复性。
2.9回收率实验取药材粉末6份，每份约0.1g，精密称定，精密加入精制多糖约13mg，按样品测定项下操作，测吸收度。
回收率(％)=(测得量－样品中多糖含量)／多糖加入量×100％
2.10样品测定取样品粉末约0.2g，精密称定，加80％乙醇100ml，超声振荡提取20min，过滤，药渣用热80％乙醇洗涤，挥干乙醇后加蒸馏水100ml超声振荡提取20min，过滤，滤渣再加80ml蒸馏水超声振荡提取20min，过滤，残渣用热水洗涤，洗液并入提取液，待冷后转移于250ml容量瓶，加蒸馏水稀释至刻度，精密吸取2.0ml，置10ml具塞试管中，按“标准曲线”项下方法自“加苯酚试剂1.0ml”起，依法操作，测得吸收度，计算样品中多糖含量。
3 讨论
本文利用苯酚一硫酸法测定了青丝线草的主要活性成分一多糖，作为评价该草药质量的指标之一。此项实验研究为首次报道，本文对青丝线草的主要化学成分的研究结果为开拓新药源提供了新的科学用药依据。多糖含量的测定有多种方法，本文选用苯酚一硫酸法，生成橙黄色溶液，在488nm处有特征吸收。此方法方便简单，最为常用，但需严格控制水解条件，否则误差较大。本实验方法操作简单，所用仪器简单，消耗成本低，在缺乏先进检测仪器的基层单位，实为一种可靠、简单的检测方法。