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[摘 要]目的；建立凝胶色谱法测定头孢唑林钠的聚合物方法。方法；采用葡聚糖凝胶Sephadex G-10 柱（16mm×33cm），流动相：A：0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0），B：O.O1%十二烷基硫酸钠溶液。流速为1mol/min；检测波长为254nm；进样量200μL。结果：头孢唑林钠在6.696-29.54mg/mL范围内，浓度与聚合物的峰面积呈良好线性关系（r=0.9986），可精确对高分子杂质峰进行定量。结论：该方法简便，准确。重现性好。
[关键词]头孢唑林钠；高分子杂质；凝胶色谱法
中图分类号：Q93-332 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2013）09-0287-01
1、概述
头孢唑啉钠为第一代头孢菌素。头孢唑林钠为白色或类白色粉末或结晶性粉末，无臭，味微苦，易引湿。头孢唑林钠适用于治疗敏感细菌所致的中耳炎、支气管炎、肺部感染、皮肤软组织感染、骨关节感染、败血症、感染性心内膜炎、肝胆系统感染及眼、耳、鼻、喉等感染；在临床上广泛应用。本类药可破坏细菌的细胞壁，并在繁殖期杀菌。对细菌的选择作用强，而对人几乎没有毒性，具有抗菌谱广、抗菌作用强、过敏反应较青霉素类少见等优点。头孢菌素类和青霉素类同属β-内酰胺抗生素，不同的是头孢菌素类的母核是7-氨基头孢烷酸（7-ACA），而青霉素的母核则是6-氨基青霉烷酸，這一结构上的差异使头孢菌素能耐受青霉素酶。头孢烷酸含有不稳定的β-内酰胺环，在有水分子存在的条件下易被水解，碱、酸和温度升高均能促进水解。β-内酰胺抗生素中的高分子是引发β-内酰胺抗生素速发型过敏原，故研究高分子杂质是抗生素药物分析的重点之一。
1、仪器与试药
BP9300-B高分子杂质分析仪（254nm紫外检测器，北京汇捷通新技术有限公司）；D100B数显定时蠕动泵（上海青浦沪西仪器厂）；N-2000双通道色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）。
头孢唑林（批号：，120509，含量99.3%，哈药集团制药总厂）；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠、磷酸、氢氧化钠均为分析纯；水为蒸馏水；葡聚糖凝胶（Sephadex）G-10、蓝色葡聚糖2000均为Pharmacia公司产品。
注射用头孢唑林钠（批号：120803、120804、120805，规格：0.5g，山东鲁抗医药股份有限公司）；注射用头孢唑林钠（批号：120904、120905、120906，规格：0.5g，哈药集团制药总厂）。
2、方法与结果
2.1 色谱条件
用葡聚糖凝胶G-10（40-120）为填充剂；玻璃柱内径1.5cm；床体积60mL；流动相A为0.01mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠2.19g和磷酸二氢钠0.54g，加水1000mL溶解，调节pH至7.0）；流动相B为O.O1%十二烷基硫酸钠溶液；流速为1mL/min；检测波长为254nin；进样量200μL。
2.2 溶液配制
2.2.1 对照品溶液的配制
取头孢唑林钠对照品25mg，精密称定，置250mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.2.2 供试品溶液的配制
取本品500mg，精密称定，置25mL量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀（临用配制）。
2.3 线性范围
2.3.1 头孢唑林钠对照品测定的线性范围：精密称取头孢唑林钠对照品31.68mg，置100mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。分别吸取1，2，3，5，10mL置25mL容量瓶中，用水稀释至刻度。将此五种溶液和贮备液分别进样200μL。对照品浓度在11.13-278.2ug/mL，范围内对峰面积呈良好线性，相关系数0.9999。
2.3.2 高分子聚合物峰的线性范围：取同一批样品，分别称取不同量配制成不同浓度的供试液，进样200μL测定聚合物的峰面积。以头孢唑林钠高分子聚合物的峰面积为纵坐标，浓度（mg/mL）为横坐标，求得回归方程：Y=0.188548281X-0.106049981，r=0.9986。结果供试液浓度在6.696-29.54mg/mL范围内对聚合物的峰面积呈良好线性关系。
2.4 缔合峰的重现性。取对照品溶液，重置进样5次，记录缔合峰峰面积。RSD为1.1%。
2.5 高分子聚合物测定的重现性。
取同一批样品约0.2g5份，精密称量，置10mL的容量瓶中。加流动相A溶解并稀释至刻度，分别进样，记录聚合物的峰面积。RSD为2.46%。
2.6 影响色谱行为的因素考察
2.6.1 流动相A的pH值。头孢唑林钠供试液分别以pH6.0，pH7.0，pH8.0三种磷酸盐缓冲液洗脱时，聚合物分离情况以pH7.0时较好。
2.6.2 流动相A中磷酸盐浓度。分别以0.05moL/L，0.1moL/L，0.2moL/L，三种浓度的pH7.0磷酸盐缓冲液为流动相洗脱时，聚合物的分离情况以0.1moL/L浓度最好。
2.7 样品测定
取供试液约0.2g，精密称量，置10mL容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀立即取200μL注入色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图；另取对照品溶液200μL注入色谱仪，以流动相B为流动相进行测定，记录色谱图，按外标法计算，测定结果6批样品（120803、120804、120805，120904、120905、120906）聚合物含量分别为0.002%，0.012%，0.0174%，0.008%，0.010%，0.036%。
3、讨论
3.1 在特定条件下，β-内酰胺类抗生素可以缔合形成表观分子量较大的缔合物，缔合物在Sephadex G-10凝胶色谱系统中的色谱行为和高分子杂质一样，都在Kav=0处，表现为单一的色谱峰。
3.2 采用自身对照外标法以头孢唑林对照品为对照，测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标，再改变色谱条件，测定供试品中的高分子杂质峰响应指标。方法简便、快速，且自身对照外标法不需专门制备标准品，又可同外标法一样精确对高分子杂质峰进行定量，结果直观。
3.3 对两个厂家6个批号的产品进行高分子杂质测定，用自身对照外标法进行定量，其含量均在0.002%～0.036%范围。
3.4 从稳定性试验结果看，注射用头孢唑林钠溶液放置时间不宜过长，其高分子杂质含量随着时间的延长会越来越高。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典2005，二部北京；化学工业出版社。
[2] 丁莉霞，陈玉英。色谱优化法分离头孢唑林钠及其相关物质，药物分析杂志，1995，15（1），3。
[3] 胡昌勤。高效液相色谱法在抗生素质控分析中的应用。
[关键词]头孢唑林钠；高分子杂质；凝胶色谱法
中图分类号：Q93-332 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2013）09-0287-01
1、概述
头孢唑啉钠为第一代头孢菌素。头孢唑林钠为白色或类白色粉末或结晶性粉末，无臭，味微苦，易引湿。头孢唑林钠适用于治疗敏感细菌所致的中耳炎、支气管炎、肺部感染、皮肤软组织感染、骨关节感染、败血症、感染性心内膜炎、肝胆系统感染及眼、耳、鼻、喉等感染；在临床上广泛应用。本类药可破坏细菌的细胞壁，并在繁殖期杀菌。对细菌的选择作用强，而对人几乎没有毒性，具有抗菌谱广、抗菌作用强、过敏反应较青霉素类少见等优点。头孢菌素类和青霉素类同属β-内酰胺抗生素，不同的是头孢菌素类的母核是7-氨基头孢烷酸（7-ACA），而青霉素的母核则是6-氨基青霉烷酸，這一结构上的差异使头孢菌素能耐受青霉素酶。头孢烷酸含有不稳定的β-内酰胺环，在有水分子存在的条件下易被水解，碱、酸和温度升高均能促进水解。β-内酰胺抗生素中的高分子是引发β-内酰胺抗生素速发型过敏原，故研究高分子杂质是抗生素药物分析的重点之一。
1、仪器与试药
BP9300-B高分子杂质分析仪（254nm紫外检测器，北京汇捷通新技术有限公司）；D100B数显定时蠕动泵（上海青浦沪西仪器厂）；N-2000双通道色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）。
头孢唑林（批号：，120509，含量99.3%，哈药集团制药总厂）；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠、磷酸、氢氧化钠均为分析纯；水为蒸馏水；葡聚糖凝胶（Sephadex）G-10、蓝色葡聚糖2000均为Pharmacia公司产品。
注射用头孢唑林钠（批号：120803、120804、120805，规格：0.5g，山东鲁抗医药股份有限公司）；注射用头孢唑林钠（批号：120904、120905、120906，规格：0.5g，哈药集团制药总厂）。
2、方法与结果
2.1 色谱条件
用葡聚糖凝胶G-10（40-120）为填充剂；玻璃柱内径1.5cm；床体积60mL；流动相A为0.01mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠2.19g和磷酸二氢钠0.54g，加水1000mL溶解，调节pH至7.0）；流动相B为O.O1%十二烷基硫酸钠溶液；流速为1mL/min；检测波长为254nin；进样量200μL。
2.2 溶液配制
2.2.1 对照品溶液的配制
取头孢唑林钠对照品25mg，精密称定，置250mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.2.2 供试品溶液的配制
取本品500mg，精密称定，置25mL量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀（临用配制）。
2.3 线性范围
2.3.1 头孢唑林钠对照品测定的线性范围：精密称取头孢唑林钠对照品31.68mg，置100mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。分别吸取1，2，3，5，10mL置25mL容量瓶中，用水稀释至刻度。将此五种溶液和贮备液分别进样200μL。对照品浓度在11.13-278.2ug/mL，范围内对峰面积呈良好线性，相关系数0.9999。
2.3.2 高分子聚合物峰的线性范围：取同一批样品，分别称取不同量配制成不同浓度的供试液，进样200μL测定聚合物的峰面积。以头孢唑林钠高分子聚合物的峰面积为纵坐标，浓度（mg/mL）为横坐标，求得回归方程：Y=0.188548281X-0.106049981，r=0.9986。结果供试液浓度在6.696-29.54mg/mL范围内对聚合物的峰面积呈良好线性关系。
2.4 缔合峰的重现性。取对照品溶液，重置进样5次，记录缔合峰峰面积。RSD为1.1%。
2.5 高分子聚合物测定的重现性。
取同一批样品约0.2g5份，精密称量，置10mL的容量瓶中。加流动相A溶解并稀释至刻度，分别进样，记录聚合物的峰面积。RSD为2.46%。
2.6 影响色谱行为的因素考察
2.6.1 流动相A的pH值。头孢唑林钠供试液分别以pH6.0，pH7.0，pH8.0三种磷酸盐缓冲液洗脱时，聚合物分离情况以pH7.0时较好。
2.6.2 流动相A中磷酸盐浓度。分别以0.05moL/L，0.1moL/L，0.2moL/L，三种浓度的pH7.0磷酸盐缓冲液为流动相洗脱时，聚合物的分离情况以0.1moL/L浓度最好。
2.7 样品测定
取供试液约0.2g，精密称量，置10mL容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀立即取200μL注入色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图；另取对照品溶液200μL注入色谱仪，以流动相B为流动相进行测定，记录色谱图，按外标法计算，测定结果6批样品（120803、120804、120805，120904、120905、120906）聚合物含量分别为0.002%，0.012%，0.0174%，0.008%，0.010%，0.036%。
3、讨论
3.1 在特定条件下，β-内酰胺类抗生素可以缔合形成表观分子量较大的缔合物，缔合物在Sephadex G-10凝胶色谱系统中的色谱行为和高分子杂质一样，都在Kav=0处，表现为单一的色谱峰。
3.2 采用自身对照外标法以头孢唑林对照品为对照，测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标，再改变色谱条件，测定供试品中的高分子杂质峰响应指标。方法简便、快速，且自身对照外标法不需专门制备标准品，又可同外标法一样精确对高分子杂质峰进行定量，结果直观。
3.3 对两个厂家6个批号的产品进行高分子杂质测定，用自身对照外标法进行定量，其含量均在0.002%～0.036%范围。
3.4 从稳定性试验结果看，注射用头孢唑林钠溶液放置时间不宜过长，其高分子杂质含量随着时间的延长会越来越高。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典2005，二部北京；化学工业出版社。
[2] 丁莉霞，陈玉英。色谱优化法分离头孢唑林钠及其相关物质，药物分析杂志，1995，15（1），3。
[3] 胡昌勤。高效液相色谱法在抗生素质控分析中的应用。