【摘 要】
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为建立灵敏、特异的G9型猪轮状病毒(PoRV) TaqMan的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的G9型PoRV NMTL株的VP7基因保守区域设计一条特异性引物和探针.以104 TC
【机 构】
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东北农业大学生命科学学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道团队
【基金项目】
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黑龙江省科研机构创新能力提升专项;
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为建立灵敏、特异的G9型猪轮状病毒(PoRV) TaqMan的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的G9型PoRV NMTL株的VP7基因保守区域设计一条特异性引物和探针.以104 TCID50的病毒液所提取的总RNA进行10倍系列稀释作为标准品,通过对反应条件进行优化,建立了检测G9型PoRV的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法.结果显示,该方法的相关系数R2=0.991,对其它常见的PoRV(G5)、猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法最低可以检测到的病毒滴度为10-3 TCID50,比普通RT-PCR方法灵敏度高约1 000倍;组内和组间变异系数均小于0.87％,稳定性高,重复性好.对疑似感染PoRV的45份临床病料样品进行检测,结果表明,该方法阳性率(64.4％)高于普通RT-PCR (44.4％),两者总符合率为80％.本研究建立的方法为PoRV的流行病学调查和早期诊断奠定基础.
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