【摘 要】
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为提高牛分枝杆菌(M.bovis)单一抗原的抗原性,本研究以重叠延伸拼接PCR技术将M.bovismpb51与mpb63基因连接,并克隆至pMD18-T中,构建重组质粒pMD-51-63.以BamH I和EcoR I双酶
【机 构】
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吉林农业大学,教育部动物生产及产品质量安全重点实验室
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为提高牛分枝杆菌(M.bovis)单一抗原的抗原性,本研究以重叠延伸拼接PCR技术将M.bovismpb51与mpb63基因连接,并克隆至pMD18-T中,构建重组质粒pMD-51-63.以BamH I和EcoR I双酶切pMD-51-63和pET28a(+),将纯化的mpb51-63融合基因亚克隆至pET28a(+)中,获得了重组表达质粒pET-51-63.该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达约46 ku的外源融合蛋白,免疫印迹实验证实,该融合蛋白具有M bovis的抗原反应性.为进一步研究mpb51-63融合基因及其表达产物作为牛结核病亚单位疫苗、核酸疫苗以及特异的诊断试剂奠定了基础.
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