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目的:建立同时检测样品中人疱疹病毒6型(human herpesvirus 6,HHV-6)和人疱疹病毒7型(human herpesvirus 7,HHV-7)核酸的单一实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法.方法:分析HHV-6、HHV-7型代表株基因组核酸序列,选取同源序列设计单一探针和分别针对HHV-6和HHV-7的扩增引物,通过试验比较和分析,确定使用混合引物对检测没有影响,对扩增温度进行优化后建立Real-time PCR方法.对所建立方法的特异性、检测下限(limit of detection,LOD)、定量下限(limit of quantitation,LOQ)、线性、准确性进行验证,使用该方法对临床样品和生物制品生产用细胞基质进行检测,并与套式PCR的检测结果进行比较.结果:经比较,HHV-6和HHV-7扩增引物混合对检测性能无影响,可分别或同时检测样品中存在的HHV-6/HHV-7核酸.特异性验证中,293细胞及PRV、VSV、VZV、EB1、EB2、EB3、CMV1/2/3、HSVI、HSVII基因组DNA样品对检测无干扰.方法的LOD和LOQ分别为:1×102 copies和1×103 copies,线性范围为1×103～1×107 copies.使用建立的Real-time PCR方法和套式PCR方法分别对86份临床血浆样品和15种生产用细胞基质样品进行检测,两种方法在临床样品中分别检出8份和4份阳性,x2分析表明,real-time PCR方法检出率显著高于套式PCR方法,15种细胞基质样品无阳性.结论:所建立的Real-time PCR方法可在单个扩增反应中同时检测HHV-6和HHV-7核酸,检测灵敏度高于传统的套式PCR方法,可用于临床样品和生产用细胞基质样品的检测.