目的 本研究旨在优化人高致病性禽流感病毒H5N1重组DNA疫苗与重组痘苗病毒疫苗联合应用的免疫方案。方法我们将前期制备的含H5N1（安徽株）结构基因的两种重组DNA疫苗（分别基于pVRC与pIRES载体骨架）及一种重组痘苗病毒（天坛株）疫苗，采用不同初免方式联合免疫BALB/c小鼠，比较分析抗原特异的体液[血凝素（hemagglutinin，HA）抑制抗体（HAI）、神经氨酸酶（neuraminidase，NA）特异性抗体、中和抗体]与细胞免疫应答（IFN-γELISPOT）特点。结果H5N1重组DNA疫苗初免、H5N1重组痘苗病毒疫苗加强的联合免疫可激发较强的体液与细胞免疫应答；其中H5N1重组DNA疫苗皮内电转初免组比肌肉电转初免组诱导的中和抗体更高。此外，基于pVRC载体的H5N1重组DNA疫苗初免诱导的HAI抗体及NA特异的细胞免疫均高于基于pIRES载体的DNA疫苗初免组；基于pVRC载体的H5N1重组DNA疫苗肌肉注射电转初免组诱导的HA特异的细胞免疫亦高于基于pIRES载体的H5N1重组DNA疫苗。结论各组H5N1重组DNA疫苗与重组痘苗病毒疫苗联合应用可诱导多个抗原特异的体液与细胞免疫应答，不同联合免疫方案对免疫原性的影响显著。该研究为新型H5N1疫苗的研发及免疫方案的优化应用奠定了基础。