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为构建猪伪狂犬病毒BarthaK61株TK缺失株,利用PCR法从猪伪狂犬病毒BarthaK61株基因组分别扩增出TK基因的左右2条臂TKR和TKL,并将TKR和TKL定向插入到pQCXIX载体中,构建pTK-转移质粒.进一步将EGFP基因插入到pTK-质粒中,构建pTK-/EGFP转移质粒.用pTK-/EGFP质粒与伪狂犬病毒BarthaK61株基因组共转染BHK-21细胞,通过挑取病变荧光蚀斑的方法获得了PRV/gE-/TK-/EGFP重组病毒.