【摘 要】
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目的 验证不同破囊液裂解载肝细胞海藻酸钠-壳聚糖(AC)微囊获取高纯度RNA的可行性.方法 破囊液A基本成分为0.1 mol/L二水合柠檬酸三钠;破囊液B的基本成分为0.2 mol/L碳酸氢钠和0.06 mol/L二水合柠檬酸三钠.将载可逆性永生化人肝细胞(Hepli4)的AC微囊分别用破囊液A(A组,n=5)和破囊液B(B组,n=5)处理.破囊后,Trizol法提取总RNA,RT-PCR法检测肝
【机 构】
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311200杭州市萧山区第一人民医院感染科,310003杭州,浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室,310003杭州,浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室,310003杭州
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目的 验证不同破囊液裂解载肝细胞海藻酸钠-壳聚糖(AC)微囊获取高纯度RNA的可行性.方法 破囊液A基本成分为0.1 mol/L二水合柠檬酸三钠;破囊液B的基本成分为0.2 mol/L碳酸氢钠和0.06 mol/L二水合柠檬酸三钠.将载可逆性永生化人肝细胞(Hepli4)的AC微囊分别用破囊液A(A组,n=5)和破囊液B(B组,n=5)处理.破囊后,Trizol法提取总RNA,RT-PCR法检测肝脏特异性功能基因.结果 A组细胞中可见微囊碎片残留,而B组细胞中基本观察不到微囊碎片.A组和B组RNA样品的A260/A280差异无统计学意义(P＞0.05),A260/A230差异有统计学意义(P＜0.05).B组RNA获得率为(8.69±0.59) μg/106细胞,A组为(2.39±0.32) μg/106,两组比较差异有统计学意义(t=21.09,P＜0.05) 以B组的RNA为模板,可检测到谷氨酰胺合成酶(GS)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT1A1)、白蛋白(ALB)等肝脏特异性功能基因.结论 以碳酸氢钠-二水合柠檬酸三钠破囊液处理载肝细胞AC微囊,能避免微囊成分污染,获得高纯度RNA.该破囊液可应用于AC微囊化肝细胞的基因表达研究。
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