【摘 要】
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目的探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)对人脑胶质瘤细胞U251细胞凋亡和细胞增殖的影响。方法利用荧光定量PCR来检测人脑胶质瘤细胞U251、SHG44以及U87中TRPM8的表达水平;设计并合成
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目的探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)对人脑胶质瘤细胞U251细胞凋亡和细胞增殖的影响。方法利用荧光定量PCR来检测人脑胶质瘤细胞U251、SHG44以及U87中TRPM8的表达水平;设计并合成靶向TRPM8的特异性sh RNA,通过脂质体转染法转染TRPM8表达最高的人脑胶质瘤细胞U251以构建稳定低表达TRPM8细胞株,通过western blot和定量PCR来验证sh RNA的干扰效率;通过MTT法检测干扰后细胞的增殖能力;通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot法检测ERK、细胞周期素D1(Cyclin D1)以及Bcl-2的表达水平。结果 U251在3株人脑胶质瘤细胞中TRPM8的表达量最高;TRPM8-sh RNA能够有效抑制U251细胞中TRPM8的表达;TRPM8-sh RNA干扰组细胞较其他两组细胞增殖显著减弱(F=132.15,P<0.01),且凋亡率显著高于U251组和U251/Con组(F=76.33,P<0.01);对比U251组和U251/Con组,TRPM8干扰组细胞的ERK、Cyclin D1以及Bcl-2的表达显著下调。结论运用RNA干扰技术能够有效沉默U251细胞的TRPM8基因,并诱导其细胞增殖能力下降以及细胞凋亡率升高,其可能的机制是通过调节细胞因子ERK来影响人脑胶质瘤细胞的增殖和凋亡。提示TRPM8在脑胶质瘤的发生发展中起重要作用,抑制TRPM8的表达可能成为一种治疗脑胶质瘤的新方法。
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