Netrin-1对T-ALL细胞中VEGFA表达的影响及相关机制研究

来源 :中国实验血液学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ilove19830517
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目的:探讨Netrin-1对急性T淋巴细胞白血病(T Cell Acute Lymphoblastic Leukemia,T-ALL)细胞中VEGFA水平的影响及可能的作用机制。方法:采用ELISA法检测10例T-ALL患儿和23例非恶性血液系统疾病患儿骨髓中Netrin-1、VEGFA的水平并进行比较,分析疾病组和对照组患儿骨髓中Netrin-1与VEGFA水平的相关性。体外培养T-ALL细胞株Jurkat、Molt-4,用不同浓度的Netrin-1(0,25,50,100 ng/ml)处理细胞24 h后,qRT-PCR及Western blot检测不同浓度下各细胞中VEGFA的表达量;qRT-PCR检测两种细胞中Netrin-1受体的表达,并采用co-IP检测Netrin-1与T-ALL细胞中受体的结合;Western blot检测各组细胞中Akt-mTOR通路中关键蛋白的磷酸化水平。使用Akt/mTOR抑制剂与Netrin-1(100 ng/ml)联合处理T-ALL细胞后,采用Western blot检测各组细胞中VEGFA的表达量以及Akt/mTOR通路中关键分子的磷酸化水平。结果:T-ALL患儿骨髓中Netrin-1及VEGFA表达水平显著高于对照组(P<0.05),且在T-ALL患者中两者表达水平呈线性相关(r2=0.974)。随着Netrin-1浓度的升高,VEGFA的表达水平也升高(P<0.05)。当Netrin-1浓度为100 ng/ml时,Netrin-1与Integrin-β4受体结合。Netrin-1浓度为100 ng/ml处理细胞24 h后,Akt、mTOR通路关键分子的磷酸化水平均提高;当Netrin-1(100 ng/ml)与Akt抑制剂联合处理T-ALL细胞后,VEGFA的表达量下降,Akt、mTOR的磷酸化水平也下降;而与mTOR抑制剂联合处理细胞后,Akt的磷酸化水平升高,mTOR的磷酸化水平降低,VEGFA的表达量也下降。结论:T-ALL患儿骨髓中Netrin-1及VEGFA表达量存在异常且两者存在线性关系;Netrin-1通过Integrin-β4受体,激活Akt/mTOR通路诱导T-ALL细胞表达VEGFA。
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