【摘 要】
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为了从猪脑中克隆得到Sirt5基因,并构建腺病毒载体,提取长白猪脑组织总RNA,利用RT-PCR和PCR扩增得到Sirt5基因.再将此基因克隆至穿梭载体上,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttl
【机 构】
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广州市微生物研究所,华南农业大学生命科学学院广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室
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为了从猪脑中克隆得到Sirt5基因,并构建腺病毒载体,提取长白猪脑组织总RNA,利用RT-PCR和PCR扩增得到Sirt5基因.再将此基因克隆至穿梭载体上,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-IRES-Sirt5.经酶切线性化,电击转化已含骨架载体pAdEasy-1DNA的BJ5183+感受态菌,得到重组腺病毒质粒Ad-Sirt5.重组腺病毒质粒经酶切线性化鉴定.结果本试验获得的Sirt5基因与NCBI公布序列一致.利用细菌同源重组技术构建重组腺病毒载体,经酶切鉴定正确.表明本试验成功克隆得到Sirt5基因,并成功构建Sirt5基因的腺病毒载体.
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