含拉米夫定耐药基因的乙型肝炎病毒全基因组载体的构建及鉴定

来源 :国际内科学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wanwan1984

【摘要】

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目的建立含拉米夫定耐药基因的乙型肝炎病毒（HBV）全基因组载体，为进一步建立耐药细胞模型奠定基础。方法采用基因扩增、重组和克隆的方法，提取HBV—DNA进行扩增，插入pBluescript—

【作者】

：

项凤梅卢建溪王强李永伟陈伟刘旭东李刚

【机构】

：

中山大学附属第三医院感染科,中山大学疫苗研究所,中山大学附属第三医院中心实验室

【出处】

：

国际内科学杂志

【发表日期】

：

2008年1期

【关键词】

：

乙型肝炎病毒全基因组定点突变拉米夫定耐药 Hepatitis virus B The whole genome Site-directed muta

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目的建立含拉米夫定耐药基因的乙型肝炎病毒（HBV）全基因组载体，为进一步建立耐药细胞模型奠定基础。方法采用基因扩增、重组和克隆的方法，提取HBV—DNA进行扩增，插入pBluescript—SK（-）载体，酶切和测序鉴定重组质粒含有HBV—DNA全基因组后，以该重组质粒的多聚酶逆转录酶区为模板，设计引入突变位点的引物，聚合酶链反应（PCR）进行定点突变，突变产物经DpnI消化后，转化到感受态细胞DH5，最后将提取的突变质粒进行测序鉴定。结果凝胶电泳分析血清HBV—DNA扩增可见3．2kb条带，HBV—DN

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