虎耳草ISSR反应体系的建立及优化

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建立并优化虎耳草ISSR—PCR反应体系和扩增程序,为探讨虎耳草种质资源遗传多样性奠定基础.采用正交设计方法和单因子试验,研究%qDNA聚合酶、dNTP、Mg^2+、引物、模板DNA、延伸时间及循环次数对PCR扩增的影响.结果表明:虎耳草ISSR—PCR的最佳反应体系为:在25μL的反应体系中含模板DNA35ng,Mg2^+1.25μmol/L、dNTP380μmol/L、引物1.2μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5u.反应程序为:95℃预变性5min;94℃变性1min,50℃(据不同引物的退火温度
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