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摘要[目的]研究超高液相色谱串联质谱法测定养殖水体中三唑磷的可行性。[方法]建立了超高效液相色谱串联质谱法测定养殖水体中三唑磷的分离方法。采用二氯甲烷和正己烷分次提取合并，用碱性氧化铝柱净化样品，以外标法定量。分别对淡水和海水进行低、中、高（1.0 、5.0、25.0 ng）3个梯度浓度进行加标，并测定其回收率。[结果]超高液相色谱串联质谱法的标准液浓度为1.0～60.0 μg/L 时，线性良好（R2=0.999 0），回收率为78.3%～88.3%，RSD为4.39%～7.56%，方法检出限在0.002 μg /L。[结论]超高液相色谱串联质谱法灵敏度高，检测速度快的特点，可用于养殖水体中三唑磷的检测分析。
关键词高液相色谱串联质谱；三唑磷；养殖水体
中图分类号S912文献标识码A文章编号0517-6611（2016）13-097-02
三唑磷（Triazophos）是一种广谱有机磷杀虫剂、杀螨剂、杀线虫剂，主要用于防治果树、棉花、粮食类作物的鳞翅目害虫、害螨、蝇类幼虫及地下害虫等， 具有强烈的触杀、胃毒作用和兼具一定内吸作用[1]。随着大多数有机氯和有机磷高毒农药的禁用，三唑磷在环境中能较快速降解，因此对其需求越来越大，且在短时间内难以被其他品种农药取代[2]。石利利等[3]研究了三唑磷在土壤中的降解特性，结果表明，降解半衰期分别为28.30、3.75和3.28 d，且不易向下渗漏[3]，三唑磷在大规模使用后可通过迁移、扩散和转化进入食物链和食物网，可对生态系统的结构和功能产生不良影响。由于三唑磷对水生生物具有毒性，国内外学者对其毒理学进行了多方面的研究[4-8]。水环境作为三唑磷的收纳体，势必会对养殖水体产生影响。目前对三唑磷的检测分析一般以GC和GC-MS为主[9-11]，而对超高液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定养殖水体中三唑磷却鲜见报道。UPLC-MS/MS法稳定快速，操作简单，分离完全，结果重现性好，是一种实用的检测方法。笔者采用UPLC-MS/MS测定了养殖水体中的三唑磷，旨在为提高养殖水体中农药测定的准确度和精确性提供科学依据。
1材料与方法
1.1供试仪器
仪器：ACQUITY 超高效液相色谱-串联质谱仪（美国Waters 公司），配电喷雾离子源； R-201旋转蒸发仪（上海精胜科学仪器有限公司）；高速离心机（Centrifuge5810，Eppendorf 公司）；涡旋振荡器；氮吹仪。
1.2供试试剂
主要试剂为碱性氧化铝柱（1∶3），乙腈（色谱纯），正己烷（色谱纯），甲酸（色谱纯），丙酮（色谱纯），纯水，滤纸。
1%甲酸水溶液：取500.00 mL水，向其中加入0.50 mL色谱纯甲酸；初始流动：取1%甲酸水溶液80.00 mL，加入120.00 mL乙腈；三唑磷标准工作液配制（100 μg/L）：三唑磷标准溶液购买于农业部环境保护部科研检测所，其浓度为（100±0.19）mg/L，溶于1.00 mL甲醇，取标准溶液0.10 mL用100.00 mL初始流动相定容至100.00 mL，现配现用。
1.3样品处理
取500.00 mL水样，用滤纸过滤其中大颗粒固体杂质，然后置于500 mL分液漏斗中，加入20.00 mL二氯甲烷溶剂，充分震荡摇匀后，静置5 min，取下层二氯甲烷有机相层过无水硫酸钠，收集于100 mL鸡型瓶内，再向水相中加入20.00 mL正己烷，充分震荡摇匀静置3 min，弃去水相层，收集正己烷过无水硫酸钠合并于100 mL鸡型瓶中，置于旋转蒸发仪上40℃旋转蒸发至干。向鸡型瓶中加入200 mL正己烷丙酮溶液（9∶1，V/V）置于涡旋震荡器上充分溶解，待测。
碱性氧化铝活化：用正己烷丙酮溶液（9∶1，V/V）3.00 mL淋洗活化，再向柱子中加入浓缩萃取液，缓慢过柱，收集有机相于10.00 mL玻璃离心管中，继续向鸡型瓶加入2.00 mL正己烷丙酮溶液（9∶1，V/V）洗脱后继续过碱性氧化铝柱，最后用1.00 mL正己烷丙酮溶液（9∶1，V/V）洗脱后，置玻璃管于氮吹仪上氮吹至干，用1%甲酸-乙腈（4∶6，V/V）溶液100 mL洗脱，经0.22 μm 滤膜过滤后，供色谱分析。
1.4色谱条件
色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C18 柱2.1 mm×50.0 mm，粒径1.7 μm，柱温40 ℃，样品温度10 ℃，进样量10 μL，流速0.3 mL / min，流动相A 为1%甲酸水溶液，B为乙腈（色谱纯）。梯度洗脱。梯度洗脱设置见表1。
1.5质谱条件
离子源：电喷雾离子源，使用正离子扫描； 检测方式：多反应监测；毛细管电压：3.0 kV；离子源温度：110 ℃；锥孔气流量：45 L/h；脱溶剂气流量：550 L/h；脱溶剂气温度：300 ℃[12]。
采用1.7 μm 填料的ACQUITY UPLC BEHC18 （21 mm×50.0 mm）色谱柱，在表1的洗脱条件下，以20.0 μg/L的三唑磷标准溶液通过调谐毛细管电压、锥孔电压和碰撞电压等条件获得最佳质谱条件，对质谱参数进行优化，优化后质谱多反应监测试验条件见表2。MRM色谱见图1，得出三唑磷保留时间在1.61 min左右出峰，相对GC-NPD、GC-MS和GC-MS/MS能更加快速地分析样品。
2结果与分析
2.1线性范围检出限
用三唑磷标准使用液配制浓度分别为1.0、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0 μg /L的标准工作溶液，进样后制作标准曲线，结果以响应值为纵坐标，三唑磷标准溶液浓度值为横坐标，以Excel线性拟合。从图2可见，在1000～60.000 μg /L 范围内方法线性良好，R2为0.999 0。以0.500 μg /L样品中测定信噪比，最终按照10倍信噪比确定该方法的定量检出限为0.002 μg/L。 2.2精密度与回收率
在三唑磷本底值未检出的养殖淡水和海水中分别加入三唑磷低、中、高（1.0、5.0、25.0 ng）3个水平的样品加标，每批加标样重复测定6次，以外标法定量，计算其回收率和精密度。
由表3可知，淡水水体和海水水体的平均回收率分别为78.30%～88.30%和80.50%～87.30%，RSD分别为5.44%～7.56%和4.39%～7.26%。
3小结
该研究建立了超高效液相色谱串联质谱法测定养殖水体中三唑磷的分析方法，采用碱性氧化铝柱净化样品，并对其检出限、精密度进行评估。结果表明：在1.0～ 60.0 μg/L 范围内方法线性良好，该方法具有灵敏度高，检测速度快，可用于养殖水体中三唑磷的检测分析。
参考文献
[1]
周常义，池信才，黄成.三唑磷对四种水生生物的毒性及安全评价研究[J].台湾海峡， 2003， 22（3）：319-324.
[2] 李爱民，王学东，杨英利，等.3种淡水藻类对三唑磷的富集行为研究[J].华中师范大学学报（自然科学版）， 2007， 41（4）： 565-568.
[3] 石利利，单正军，蔡道基.三唑磷农药在土壤中的降解与吸附特性研究[J].农业环境科学学报， 2006， 25（3）： 733-736.
[4] 陈波宇，郑斯瑞，牛希成，等.水生生物对三唑磷的物种敏感度分布研究[J].环境科学， 2011， 32（4）： 1101-1107.
[5] 李文静，黎中宝，郑伟刚，等.三唑磷对5种鳗鲡幼鳗的急性毒性实验[J].南方水产， 2009， 5（6）： 13-18.
[6] 罗朝晖，黄煜，洪彩熔.三唑磷农药对鲫鱼肝脏过氧化氢酶活性的影响[J].安徽农业科学， 2007， 35（36）： 11867-11868.
[7] 金彩杏，丁跃平，刘士忠，等.三唑磷农药对鲈鱼等鱼类的急性毒性试验[J].水产科技情报， 2002， 29（4）： 156- 158.
[8] 钟志，刘士忠，郭远明，等.三唑磷在养殖泥蚶和缢蛏中的积累和消除规律[J].中国兽药杂志， 2007， 41（5）： 18- 20.
[9] 何云亚，周伦敏.气相色谱法测定水样中三唑磷残留量[J].理化检验-化学分册，2009， 45（6）： 717-718.
[10] 徐莹.气相色谱法测定水样及生物体中三唑磷的残留量[J].中国环境检测， 2002， 19（6）： 1-3.
[11] 薛超波，刘慧慧，王国良，等.海洋滩涂沉积物环境中三唑磷残留的GCM/S检测[J].中国卫生检验杂志， 2006， 16（5）： 522-524.
[12] 严忠雍，张小军，梅光明，等.N-丙基乙二胺快速净化结合UPLC-MS/MS测定水产品中氯霉素残留量[J].中国渔业质量与标准，2013，3（6）：65-69.
关键词高液相色谱串联质谱；三唑磷；养殖水体
中图分类号S912文献标识码A文章编号0517-6611（2016）13-097-02
三唑磷（Triazophos）是一种广谱有机磷杀虫剂、杀螨剂、杀线虫剂，主要用于防治果树、棉花、粮食类作物的鳞翅目害虫、害螨、蝇类幼虫及地下害虫等， 具有强烈的触杀、胃毒作用和兼具一定内吸作用[1]。随着大多数有机氯和有机磷高毒农药的禁用，三唑磷在环境中能较快速降解，因此对其需求越来越大，且在短时间内难以被其他品种农药取代[2]。石利利等[3]研究了三唑磷在土壤中的降解特性，结果表明，降解半衰期分别为28.30、3.75和3.28 d，且不易向下渗漏[3]，三唑磷在大规模使用后可通过迁移、扩散和转化进入食物链和食物网，可对生态系统的结构和功能产生不良影响。由于三唑磷对水生生物具有毒性，国内外学者对其毒理学进行了多方面的研究[4-8]。水环境作为三唑磷的收纳体，势必会对养殖水体产生影响。目前对三唑磷的检测分析一般以GC和GC-MS为主[9-11]，而对超高液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定养殖水体中三唑磷却鲜见报道。UPLC-MS/MS法稳定快速，操作简单，分离完全，结果重现性好，是一种实用的检测方法。笔者采用UPLC-MS/MS测定了养殖水体中的三唑磷，旨在为提高养殖水体中农药测定的准确度和精确性提供科学依据。
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主要试剂为碱性氧化铝柱（1∶3），乙腈（色谱纯），正己烷（色谱纯），甲酸（色谱纯），丙酮（色谱纯），纯水，滤纸。
1%甲酸水溶液：取500.00 mL水，向其中加入0.50 mL色谱纯甲酸；初始流动：取1%甲酸水溶液80.00 mL，加入120.00 mL乙腈；三唑磷标准工作液配制（100 μg/L）：三唑磷标准溶液购买于农业部环境保护部科研检测所，其浓度为（100±0.19）mg/L，溶于1.00 mL甲醇，取标准溶液0.10 mL用100.00 mL初始流动相定容至100.00 mL，现配现用。
1.3样品处理
取500.00 mL水样，用滤纸过滤其中大颗粒固体杂质，然后置于500 mL分液漏斗中，加入20.00 mL二氯甲烷溶剂，充分震荡摇匀后，静置5 min，取下层二氯甲烷有机相层过无水硫酸钠，收集于100 mL鸡型瓶内，再向水相中加入20.00 mL正己烷，充分震荡摇匀静置3 min，弃去水相层，收集正己烷过无水硫酸钠合并于100 mL鸡型瓶中，置于旋转蒸发仪上40℃旋转蒸发至干。向鸡型瓶中加入200 mL正己烷丙酮溶液（9∶1，V/V）置于涡旋震荡器上充分溶解，待测。
碱性氧化铝活化：用正己烷丙酮溶液（9∶1，V/V）3.00 mL淋洗活化，再向柱子中加入浓缩萃取液，缓慢过柱，收集有机相于10.00 mL玻璃离心管中，继续向鸡型瓶加入2.00 mL正己烷丙酮溶液（9∶1，V/V）洗脱后继续过碱性氧化铝柱，最后用1.00 mL正己烷丙酮溶液（9∶1，V/V）洗脱后，置玻璃管于氮吹仪上氮吹至干，用1%甲酸-乙腈（4∶6，V/V）溶液100 mL洗脱，经0.22 μm 滤膜过滤后，供色谱分析。
1.4色谱条件
色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C18 柱2.1 mm×50.0 mm，粒径1.7 μm，柱温40 ℃，样品温度10 ℃，进样量10 μL，流速0.3 mL / min，流动相A 为1%甲酸水溶液，B为乙腈（色谱纯）。梯度洗脱。梯度洗脱设置见表1。
1.5质谱条件
离子源：电喷雾离子源，使用正离子扫描； 检测方式：多反应监测；毛细管电压：3.0 kV；离子源温度：110 ℃；锥孔气流量：45 L/h；脱溶剂气流量：550 L/h；脱溶剂气温度：300 ℃[12]。
采用1.7 μm 填料的ACQUITY UPLC BEHC18 （21 mm×50.0 mm）色谱柱，在表1的洗脱条件下，以20.0 μg/L的三唑磷标准溶液通过调谐毛细管电压、锥孔电压和碰撞电压等条件获得最佳质谱条件，对质谱参数进行优化，优化后质谱多反应监测试验条件见表2。MRM色谱见图1，得出三唑磷保留时间在1.61 min左右出峰，相对GC-NPD、GC-MS和GC-MS/MS能更加快速地分析样品。
2结果与分析
2.1线性范围检出限
用三唑磷标准使用液配制浓度分别为1.0、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0 μg /L的标准工作溶液，进样后制作标准曲线，结果以响应值为纵坐标，三唑磷标准溶液浓度值为横坐标，以Excel线性拟合。从图2可见，在1000～60.000 μg /L 范围内方法线性良好，R2为0.999 0。以0.500 μg /L样品中测定信噪比，最终按照10倍信噪比确定该方法的定量检出限为0.002 μg/L。 2.2精密度与回收率
在三唑磷本底值未检出的养殖淡水和海水中分别加入三唑磷低、中、高（1.0、5.0、25.0 ng）3个水平的样品加标，每批加标样重复测定6次，以外标法定量，计算其回收率和精密度。
由表3可知，淡水水体和海水水体的平均回收率分别为78.30%～88.30%和80.50%～87.30%，RSD分别为5.44%～7.56%和4.39%～7.26%。
3小结
该研究建立了超高效液相色谱串联质谱法测定养殖水体中三唑磷的分析方法，采用碱性氧化铝柱净化样品，并对其检出限、精密度进行评估。结果表明：在1.0～ 60.0 μg/L 范围内方法线性良好，该方法具有灵敏度高，检测速度快，可用于养殖水体中三唑磷的检测分析。
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