【摘 要】
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为进一步提高RT PCR检测西部马脑炎病毒 (WEE)病毒基因组方法的敏感性 ,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列。首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA
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为进一步提高RT PCR检测西部马脑炎病毒 (WEE)病毒基因组方法的敏感性 ,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列。首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行扩增。对扩增后电泳检查无可见DNA条带的产物进行半套式PCR ;与此同时对扩增的循环数、Mg++浓度和退火温度等条件进行了优化 ,以进一步提高扩增的特异性。结果第一轮PCR未扩出特异性片段的WEE病毒稀释度 ,其半套式扩增出特定大小的DNA产物 ;同时优化的条件提高了扩增产物的特异性。扩增产物约为 190bp的单一DNA片段 ,其大小与预期的相一致。结果表明采用半套式RT PCR方法检测WEE病毒的基因组序列的敏感性可提高 10 0倍以上
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