【摘 要】
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目的 观察抑制恶性胶质瘤LN229细胞中Girdin蛋白的表达对细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制.方法 利用小RNA干扰(siRNA)技术,沉默LN229细胞中Girdin的表达,得到实验组克隆(siG
【机 构】
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乳腺癌防治教育部重点实验室 天津市肿瘤防治重点实验室 天津医科大学附属肿瘤医院中心实验室,乳腺癌防治教育部重点实验室 天津市肿瘤防治重点实验室 天津医科大学附属肿瘤医院乳腺病理研究室,乳腺癌防治教育部
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目的 观察抑制恶性胶质瘤LN229细胞中Girdin蛋白的表达对细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制.方法 利用小RNA干扰(siRNA)技术,沉默LN229细胞中Girdin的表达,得到实验组克隆(siGirdin/LN229),阴性对照组命名为scr/LN229.采用Western blot技术检测Girdin、细胞色素C(Cyt-C)及Bad蛋白水平的变化.利用增殖实验、噻唑蓝(MTT)比色法检测LN229细胞的存活率;应用流式细胞术检测线粒体释放的Cyt-C量的变化.建立成瘤模型(每组20只),观察Girdin降表达对移植瘤生长情况的影响.结果 siRNA技术有效沉默了LN229细胞中Girdin的表达.增殖实验显示siGirdin/LN229细胞增殖能力下降(P＜0.05),至第6天时实验组细胞数为(15.08±1.17)×104;对照组为(53.93±6.26)×104.MTT实验发现siGirdin/LN229细胞的存活率明显下降(P＜0.05),第5天时实验组为(323.15±57.01)%;对照组为(640.67±59.66)%.流式检测显示siGirdin/LN229细胞Cyt-C含量增加,平均荧光强度为12531.00±1412.98,对照组为183.67±41.55(P＜0.01).分析Western blot结果显示,siGirdin/LN229细胞Cyt-C、Bad的相对灰度值分别为3.57±0.43和4.78±1.03,均高于对照组Cyt-C、Bad的表达水平(相对灰度值分别为1.13±0.1 1、1.78±0.20).体内实验证实Girdin降表达组肿瘤体积明显小于对照组(P＜0.05),至第7.5周时.siGirdin/LN229组肿瘤体积为(36.42±2.00)mm3,对照组为(262.42±24.12)mm3.结论 Girdin能够调控胶质瘤细胞LN229的凋亡,其调节细胞凋亡的机制可能与Cyt-C从线粒体释放及Bad的表达有关.
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