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摘要 [目的]建立食用植物油中3种抗氧化剂含量的测定方法。[方法]利用甲醇溶解提取与离心相结合的技术进行脱脂处理，采用反相高效液相色谱法同时测定食用植物油中特丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚（BHA）和二丁基羟基甲苯（BHT）含量。[结果]TBHQ、BHA、BHT浓度在1～10 mg/L时线性关系良好，相关系数分别为0.999 92、0.999 95、0.999 93；检出限分别为0.54、0.48、0.48 mg/kg，回收率为73.7%～97.3%。[结论]该方法准确、灵敏，适用于各类植物油的TBHQ、BHA、BHT含量分析。
关键词 食用植物油；特丁基对苯二酚；丁基羟基茴香醚；二丁基羟基甲苯；脱脂处理；高效液相色谱法
中图分类号 TS225.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）18-0089-02
Abstract [Objective] To establish a method for determination of 3 antioxidants content in edible vegetable oil.[Method] The content of TBHQ，BHA，BHT in edible vegetable oil was determined by reversed phase high performance liquid chromatography （HPLC），using the technology of methanol extraction and centrifugation to conduct degreasing.[Result] Experimental results showed that the experiment of TBHQ，BHA，BHT had a good liner relationship in concentration range of 1-10 mg/L，the correlation coefficient of linear curve were 0.999 92，0.999 95，0.999 93； the limits of detection were 0.54，0.48，0.48 mg/kg； the recovery of 3 antioxidants ranged from 73.7% to 97.3%.[Conclusion] The method was proved to be highly efficient，robust and sensitive，and was suitable for the analysis of TBHQ，BHA，BHT in edible vegetable oil.
Key words Edible vegetable oil；TBHQ；BHQ；BHT；Degreasing treatment；High liquid performance chromatography
食用植物油是人們日常生活必需食品之一，近年来频频发生的食品安全事件中不乏与食用油有关的事件，抗氧化剂等安全性指标超出限量标准的情况会对人们身体健康造成不可逆转的伤害，加剧了消费者对食品安全的信任危机。
特丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）3类合成酚类抗氧化剂作为食品添加剂，能起到防止或延缓油脂氧化，提高油脂的稳定性和延长贮存期的作用，在食用植物油生产环节中常被单独或混合使用。然而过量食用含抗氧化剂的食品，对人体肝、脾、肾等器官均有不利的影响，因此各国对食用抗氧化剂都有严格的使用限量规定。在我国食品添加剂使用卫生标准GB2760中，对3种抗氧化剂在油及食用油脂食品中使用限量规定均≤0.2 g/kg。食用植物油TBHQ、BHA、BHT在现行GB/T 23373介绍的检测方法中，样品经有机溶剂提取、并用价格昂贵的凝胶渗透色谱净化系统进行样品脱脂预处理，应用高效液相色谱法进行检测。凝胶渗透色谱净化系统价格昂贵、前处理繁琐、时间长，笔者采用甲醇溶解提取与离心相结合技术进行脱脂处理优化，采用液相色谱法检测食用植物油中TBHQ、BHA、BHT 3类抗氧化剂的含量，重点考察了方法的检出限、线性范围、重复性、回收率等重要的色谱方法学参数。
1 材料与方法
1.1 材料 供试花生油样品，市售。主要仪器：Agilent 1260液相色谱仪（配紫外检测器）；Sartorius BSA124S电子天平；森田 TD5A 离心机；Vortex XH-B漩涡混匀器。主要试剂：甲醇（色谱纯）；试验用水为一级水；TBHQ、BHA、BHT标准品（Dr.Ehrenstorfer）。
1.2 标准溶液配制
1.2.1 标准储备液。分别称取3种抗氧化剂标准品各50.0 mg，用甲醇定容至50 mL，浓度为1 mg/mL。
1.2.2 标准工作液。将标准储备液用甲醇稀释成1、2、4、8、10 mg/L 5个标准系列溶液。
1.3 液相色谱参考条件 色谱柱为C18柱（4.6 mm×250 mm，粒度2.7 μm）；进样量15 μL；
流动相：甲醇（A），水（B）。洗脱梯度：0～5.0 min，流動相A为30%；5.0～21.5 min，流动相A从30%变化为80%；21.5～40.0 min，流动相A为80%；40.0～50.0 min，流动相A为30%。流速1 mL/min；柱温40 ℃；紫外检测器波长280 nm。
1.4 样品前处理
准确称取2 g植物油样于10 mL塑料离心管中，用10 mL甲醇分3次（3+3+4）分别在漩涡混匀器上快速混匀1 min，离心（2 000 r/min）5 min，吸取上清液合并于10 mL离心管中；摇匀后经0.22 μm滤膜过滤，供分析。 2 结果与分析
2.1 标准曲线及检出限
标准样品色谱见图1。将浓度为1、2、4、8、10 μg/L 5个标准系列溶液上机测定，根据峰的积分面积绘制5点校正曲线。获得线性回归方程、相关系数及检出限（S/N）结果分别如下（图2）：TBHQ的线性回归方程为y=5.208 621 66x-0.185 173 5，相关系数r2=0.999 92，检出限为0.54 mg/kg；BHA的线性回归方程为y=5.809 462 9x+0.218 803 4，相关系数r2=0.999 95，检出限为0.48 mg/kg；BHT的线性回归方程为y=3.799 519 6x+0.265 006 1，相关系数r2=0.999 93，检出限为0.48 mg/kg。
2.2 样品重复性及回收率
2.2.1 重复性试验。选取市售2款花生油进行测定，平行测定6次，测得样品中TBHQ、BHA、BHT的平均浓度、RSD試验数据见表1。表1中重复性试验数据表明，该方法具有良好的重现性。
2.2.2 回收率试验。
取花生油阴性样品，分别对该花生油进行3个浓度的加标试验，每个加标浓度样品平行测定6次，测得回收率、RSD具体试验数据见表2。表2回收率试验数据表明，该方法具有较高的精密度和准确度。
3 结论
该研究通过对食用油脂苯并（α）芘、抗氧化剂含量检测方法进行优化，试验步骤简单，试剂消耗量少，检测时间大大缩短，检测成本低，并且方法重现性良好、加标回收率较高，具有较高的精密度和准确度。表明上述方法满足实验室对使用油脂苯并（α）芘、抗氧化剂的定量分析测定。
参考文献
[1] 林海宏.高效液相色谱法快速测定食品中的四种抗氧化剂[J].福建轻纺，2008（7）：10-13.
[2] 刘年丰，涂一名，夏虹，等.高效液相色谱法测定油脂中抗氧化剂BHA、TBHQ[J].分析科学学报，2003，19（6）：549-551.
[3] 陈毓芳，奚星林，李宪华，等.高效液相色谱法同时测定食用油脂中叔丁基对苯二酚和叔丁基对羟基茴香醚[J].中国卫生检验杂志，2007，17（7）：1163-1164.
[4] 国家食品质量安全监督检验中心.食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）、特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定：GB/T 23373—2009[S].北京：中国标准出版社，2009.
[5] 吴永宁.现代食品安全科学[M].北京：化学工业出版社，2003.
[6] 宋怀恩，闻韧.抗氧化剂筛选方法的研究进展[J].中国药物化学杂志，2003，13（2）：119-124.
关键词 食用植物油；特丁基对苯二酚；丁基羟基茴香醚；二丁基羟基甲苯；脱脂处理；高效液相色谱法
中图分类号 TS225.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）18-0089-02
Abstract [Objective] To establish a method for determination of 3 antioxidants content in edible vegetable oil.[Method] The content of TBHQ，BHA，BHT in edible vegetable oil was determined by reversed phase high performance liquid chromatography （HPLC），using the technology of methanol extraction and centrifugation to conduct degreasing.[Result] Experimental results showed that the experiment of TBHQ，BHA，BHT had a good liner relationship in concentration range of 1-10 mg/L，the correlation coefficient of linear curve were 0.999 92，0.999 95，0.999 93； the limits of detection were 0.54，0.48，0.48 mg/kg； the recovery of 3 antioxidants ranged from 73.7% to 97.3%.[Conclusion] The method was proved to be highly efficient，robust and sensitive，and was suitable for the analysis of TBHQ，BHA，BHT in edible vegetable oil.
Key words Edible vegetable oil；TBHQ；BHQ；BHT；Degreasing treatment；High liquid performance chromatography
食用植物油是人們日常生活必需食品之一，近年来频频发生的食品安全事件中不乏与食用油有关的事件，抗氧化剂等安全性指标超出限量标准的情况会对人们身体健康造成不可逆转的伤害，加剧了消费者对食品安全的信任危机。
特丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）3类合成酚类抗氧化剂作为食品添加剂，能起到防止或延缓油脂氧化，提高油脂的稳定性和延长贮存期的作用，在食用植物油生产环节中常被单独或混合使用。然而过量食用含抗氧化剂的食品，对人体肝、脾、肾等器官均有不利的影响，因此各国对食用抗氧化剂都有严格的使用限量规定。在我国食品添加剂使用卫生标准GB2760中，对3种抗氧化剂在油及食用油脂食品中使用限量规定均≤0.2 g/kg。食用植物油TBHQ、BHA、BHT在现行GB/T 23373介绍的检测方法中，样品经有机溶剂提取、并用价格昂贵的凝胶渗透色谱净化系统进行样品脱脂预处理，应用高效液相色谱法进行检测。凝胶渗透色谱净化系统价格昂贵、前处理繁琐、时间长，笔者采用甲醇溶解提取与离心相结合技术进行脱脂处理优化，采用液相色谱法检测食用植物油中TBHQ、BHA、BHT 3类抗氧化剂的含量，重点考察了方法的检出限、线性范围、重复性、回收率等重要的色谱方法学参数。
1 材料与方法
1.1 材料 供试花生油样品，市售。主要仪器：Agilent 1260液相色谱仪（配紫外检测器）；Sartorius BSA124S电子天平；森田 TD5A 离心机；Vortex XH-B漩涡混匀器。主要试剂：甲醇（色谱纯）；试验用水为一级水；TBHQ、BHA、BHT标准品（Dr.Ehrenstorfer）。
1.2 标准溶液配制
1.2.1 标准储备液。分别称取3种抗氧化剂标准品各50.0 mg，用甲醇定容至50 mL，浓度为1 mg/mL。
1.2.2 标准工作液。将标准储备液用甲醇稀释成1、2、4、8、10 mg/L 5个标准系列溶液。
1.3 液相色谱参考条件 色谱柱为C18柱（4.6 mm×250 mm，粒度2.7 μm）；进样量15 μL；
流动相：甲醇（A），水（B）。洗脱梯度：0～5.0 min，流動相A为30%；5.0～21.5 min，流动相A从30%变化为80%；21.5～40.0 min，流动相A为80%；40.0～50.0 min，流动相A为30%。流速1 mL/min；柱温40 ℃；紫外检测器波长280 nm。
1.4 样品前处理
准确称取2 g植物油样于10 mL塑料离心管中，用10 mL甲醇分3次（3+3+4）分别在漩涡混匀器上快速混匀1 min，离心（2 000 r/min）5 min，吸取上清液合并于10 mL离心管中；摇匀后经0.22 μm滤膜过滤，供分析。 2 结果与分析
2.1 标准曲线及检出限
标准样品色谱见图1。将浓度为1、2、4、8、10 μg/L 5个标准系列溶液上机测定，根据峰的积分面积绘制5点校正曲线。获得线性回归方程、相关系数及检出限（S/N）结果分别如下（图2）：TBHQ的线性回归方程为y=5.208 621 66x-0.185 173 5，相关系数r2=0.999 92，检出限为0.54 mg/kg；BHA的线性回归方程为y=5.809 462 9x+0.218 803 4，相关系数r2=0.999 95，检出限为0.48 mg/kg；BHT的线性回归方程为y=3.799 519 6x+0.265 006 1，相关系数r2=0.999 93，检出限为0.48 mg/kg。
2.2 样品重复性及回收率
2.2.1 重复性试验。选取市售2款花生油进行测定，平行测定6次，测得样品中TBHQ、BHA、BHT的平均浓度、RSD試验数据见表1。表1中重复性试验数据表明，该方法具有良好的重现性。
2.2.2 回收率试验。
取花生油阴性样品，分别对该花生油进行3个浓度的加标试验，每个加标浓度样品平行测定6次，测得回收率、RSD具体试验数据见表2。表2回收率试验数据表明，该方法具有较高的精密度和准确度。
3 结论
该研究通过对食用油脂苯并（α）芘、抗氧化剂含量检测方法进行优化，试验步骤简单，试剂消耗量少，检测时间大大缩短，检测成本低，并且方法重现性良好、加标回收率较高，具有较高的精密度和准确度。表明上述方法满足实验室对使用油脂苯并（α）芘、抗氧化剂的定量分析测定。
参考文献
[1] 林海宏.高效液相色谱法快速测定食品中的四种抗氧化剂[J].福建轻纺，2008（7）：10-13.
[2] 刘年丰，涂一名，夏虹，等.高效液相色谱法测定油脂中抗氧化剂BHA、TBHQ[J].分析科学学报，2003，19（6）：549-551.
[3] 陈毓芳，奚星林，李宪华，等.高效液相色谱法同时测定食用油脂中叔丁基对苯二酚和叔丁基对羟基茴香醚[J].中国卫生检验杂志，2007，17（7）：1163-1164.
[4] 国家食品质量安全监督检验中心.食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）、特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定：GB/T 23373—2009[S].北京：中国标准出版社，2009.
[5] 吴永宁.现代食品安全科学[M].北京：化学工业出版社，2003.
[6] 宋怀恩，闻韧.抗氧化剂筛选方法的研究进展[J].中国药物化学杂志，2003，13（2）：119-124.