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目的
建立戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)不同基因型RNA实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测方法及其所需质粒标准品，以利于临床一线实验室展开应用。
方法选取HEV ORF3高度保守区设计可检测HEV不同基因型病毒株的引物和探针；将拟扩增的HEV RNA目的基因片段构建成质粒，制备HEV质粒DNA标准品，用于浓度标准曲线及一步法qRT-PCR检测方法的建立；同时检测并分析HEV核酸与抗原和抗体之间的相关性；采用逆转录-巢式PCR(RT-nPCR)进行对比验证，并对部分阳性标本进行测序，通过生物进化树分析其流行病学特点。
结果成功建立基于HEV质粒标准品的qRT-PCR检测方法，适用于血清及粪便标本，最低检测限可达25拷贝/test；HEV核酸与抗原的检测结果具有较好的相关性，两者一致性达77.8%；经生物进化树分析发现9位HEV RNA阳性患者均感染为基因4型，但分属4a、4d和4n三个不同的基因亚型。
结论成功建立基于HEV质粒标准品的qRT-PCR检测方法，为后续临床应用商品化提供技术支持。