【摘 要】
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目的 探讨顺铂联合树突状细胞(DC)疫苗对荷瘤小鼠抗肿瘤作用的机制.方法 用终浓度20μg/ml顺铂诱导体外培养的小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡,提取凋亡细胞总蛋白.Westernblot法检
【机 构】
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河北医科大学分子生物学研究室实验动物重点实验室,河北医科大学分子生物学研究室实验动物免疫教研室
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目的 探讨顺铂联合树突状细胞(DC)疫苗对荷瘤小鼠抗肿瘤作用的机制.方法 用终浓度20μg/ml顺铂诱导体外培养的小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡,提取凋亡细胞总蛋白.Westernblot法检测高迁移率蛋白B1( HMGB1)、热休克蛋白70 (Hsp70)和转化生长因子β(TGF-β)蛋白表达,流式细胞仪分析DCs表面主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和CD86的表达.制备荷瘤小鼠模型,腹腔注射顺铂(100μg/只),瘤内注射DC疫苗(3×106个/只),28 d后处死荷瘤小鼠,分离肿瘤组织并称重.采用不连续梯度离心法分离肿瘤浸润淋巴细胞,流式细胞仪检测调节性T细胞(T-reg)和CD8+T细胞的分布,采用微量细胞毒方法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性.结果 顺铂可明显提高B16细胞HMGB1的表达水平.经顺铂诱导的B16凋亡细胞总蛋白负载DC细胞后,其MHCⅡ、CD86+和ICAM-1的表达率分别为(47.5±8.8)％、(36.2±9.2)％和(35.5±8.3)％.在肿瘤移植的第28天,对照组瘤重为(2.1±0.6)g,顺铂组和顺铂联合DC疫苗组瘤重分别为(0.3±0.2)g和(0.5±0.2)g,顺铂组和顺铂联合DC疫苗组瘤重明显小于对照组(P＜0.01).顺铂联合DC疫苗不仅提高了肿瘤组织中CD8+ T/CD4+ Foxp3+T细胞比值,还增强了 CTL活性.在效靶比为20∶1、10∶1和5∶1时,顺铂联合DC疫苗组荷瘤小鼠的CTL活性分别为(25.0±5.0)％、(22.0±6.0)％和(14.0±4.0)％,显著高于对照组的(8.2±3.6)％、(6.7±1.8)％和(3.6±1.9)％(均P＜0.01).结论 顺铂联合DC疫苗可下调肿瘤微环境的T-reg细胞,提高CTL活性协同发挥抗肿瘤作用.
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