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采用戊二醛（GA）一步法将半抗原伏马菌素B1（FB1）分别与鸡卵清蛋白（OVA）、牛血清白蛋白（BSA）偶联,制备2种具有免疫原性的FB1人工抗原FB1-OVA和FB1-BSA。分别采用凝胶电泳法、紫外光谱法（UV）、红外光谱法（IR）、基质辅助激光分析电离飞行时间质谱法（MALDI-TOF-MS）4种方法鉴定人工抗原偶联效果并测定偶联比。将FB1-BSA作为免疫抗原免疫BALB/c小鼠,FB1-OVA作为固相包被抗原,采用间接酶联免疫吸附法（i-ELISA）测定小鼠抗血清滴度。结果表明：4种方法均鉴定F