【摘 要】
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目的:建立紫萼藓科(Grimmiaceae)植物ISSR - PCR反应的最佳体系.方法:通过L16(45)正交试验,研究了dNTP浓度、镁离子浓度、模板DNA浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度这5个因
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目的:建立紫萼藓科(Grimmiaceae)植物ISSR - PCR反应的最佳体系.方法:通过L16(45)正交试验,研究了dNTP浓度、镁离子浓度、模板DNA浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度这5个因素在4个水平上对ISSR - PCR的影响.结果:建立了紫萼藓科ISSR - PCR反应的最佳反应体系,其中dNTPs浓度为0.8mmol/L、Mg2+浓度为3.0mmol/L、模板为15ng、引物浓度为1.4 μmol/L、Taq酶量2U,总体积为25μl.反应程序为:扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,48～52℃退火1min,72℃延伸2min,共40个循环;72C延伸10min;4℃保存.采用引物UBC812等均能够得到有效扩增.结论:该优化体系的建立为下一步对紫萼藓进行ISSR分子标记奠定了基础.
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