【摘 要】
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目的 探究白屈菜红碱(CHE)对腺样囊性癌细胞(ACC2)生长的抑制作用及机制.方法 利用CCK8法、EdU法、Hoechst33342/PI双染色法、试剂盒法检测CHE对ACC2细胞活力、细胞增殖、细
【机 构】
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齐鲁工业大学(山东省科学院),山东省人类疾病斑马鱼模型与药物筛选工程技术研究中心,山东省生物检测技术工程实验室
【基金项目】
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国家重点研发计划(2018YFC1707300),山东省重大科技创新工程项目(2019JZZY020905),齐鲁工业大学(山东省科学院)科教产融合创新试点工程项目(2020KJC-ZD08)。
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目的 探究白屈菜红碱(CHE)对腺样囊性癌细胞(ACC2)生长的抑制作用及机制.方法 利用CCK8法、EdU法、Hoechst33342/PI双染色法、试剂盒法检测CHE对ACC2细胞活力、细胞增殖、细胞凋亡和活性氧(ROS)水平的影响;通过Western blotting技术检测CHE对Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB、p-JNK、p-p38蛋白表达的影响;利用斑马鱼移植瘤模型检测CHE对斑马鱼体内ACC2细胞生长的抑制作用.结果 CCK-8结果显示:与对照组比较,2、3、4、5、6、7、8、9、10 μmol/L的CHE显著降低ACC2细胞的存活率(P<0.05、0.01),且呈浓度相关性;ROS检测结果显示:与对照组比较,5、8 μmol/L的CHE导致ACC2细胞内的ROS水平显著上升(P<0.05、0.01);EdU增殖检测结果表明:与对照组比较,5、8 μmol/L的CHE致使ACC2细胞的增殖能力显著下降(P<0.01);Hoechst/PI染色结果显示:与对照组比较,CHE 5、8 μmol/L组ACC2细胞凋亡率显著上升(P<0.01).抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)显著抑制CHE诱导的ROS水平升高、细胞凋亡增加(P<0.01);Western blotting结果显示:2、5、8μmol/L的CHE能够显著上调Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB蛋白的表达(P<0.01),且呈现浓度相关性,5、8μmol/L的CHE能够显著上调p-JNK的蛋白表达(P<0.01),8 μmol/L的CHE能够显著上调p-p38的蛋白表达(P<0.01);NAC显著降低由CHE导致的Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB、p-JNK、p-p38蛋白表达增加(P<0.01),5、8μmol/L CHE能够有效抑制斑马鱼体内肿瘤的生长(P<0.01).结论 体外及斑马鱼移植瘤模型证明,CHE可以有效抑制ACC2细胞生长,其机制与提高细胞ROS水平,上调NF-κB、p-JNK、p-p38表达,从而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡相关.
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