【摘 要】
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为筛选白纹伊蚊与相关蚊媒病毒相互作用的基因,本文构建了白纹伊蚊Aedes albopictus T7噬菌体展示cDNA文库,分离与纯化白纹伊蚊mRNA,所得 mRNA经反转录合成双链cDNA后,在双链
【机 构】
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山西医科大学病原生物学教研室,太原,030001;军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071
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为筛选白纹伊蚊与相关蚊媒病毒相互作用的基因,本文构建了白纹伊蚊Aedes albopictus T7噬菌体展示cDNA文库,分离与纯化白纹伊蚊mRNA,所得 mRNA经反转录合成双链cDNA后,在双链cDNA 末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头使其两端分别带EcoRⅠ和Hind Ⅲ黏性末端;接着用Mini Column 纯化收集300 bp 以上的双链cDNA 片段连接于T7 Select 10-3b 载体;经体外包装后,以BLT 5403 为受体菌构建T7 噬菌体展示cDNA 文库.所建文库的库容量经测定为1.7×107 pfu/mL,扩增后文库滴度为2.5×1013 pfu/mL.对从原始文库中随机挑取的50个噬菌斑进行PCR 鉴定,重组率为95% 以上;阳性克隆片段长度分布在200～2 000 bp,其中有90%的插入片段大于300 bp.本文所构建的白纹伊蚊T7噬菌体展示cDNA文库,满足cDNA文库的基本要求,可以用于筛选白纹伊蚊与相关蚊病毒相互作用的基因.
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