【摘 要】
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目的:构建B、 T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因转染的细胞作为免疫原, 并探讨该基因转染细胞在体外的生物学功能.方法:通过RT-PCR法从经PHA活化的人外周血T细胞中克隆出人BTLA编码
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目的:构建B、 T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因转染的细胞作为免疫原, 并探讨该基因转染细胞在体外的生物学功能.方法:通过RT-PCR法从经PHA活化的人外周血T细胞中克隆出人BTLA编码区全长基因, 经EcoR I和BamH I双酶切后插入逆转录病毒载体pEGZ-Term中构建成重组载体pEGZ-Term/BTLA.用脂质体法以重组逆转录病毒载体转染293T细胞, 并用Zeocin抗生素进行长期筛选; 流式细胞术分析BTLA在基因转染细胞膜上的表达; 通过MTT法和流式细胞术探讨基因转染细胞在体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响.结果:流式细胞术检测表明BTLA基因转染的293T细胞膜上能稳定地高表达人BTLA蛋白.BTLA基因转染的293T细胞和T细胞体外共培养显示, 与未转染的293T细胞相比, 该基因转染的细胞能部分地抑制抗人CD3单克隆抗体(mAb)刺激的T细胞增殖; 流式细胞术和ELISA法分析揭示, 该基因转染的细胞能够下调T细胞表面活化标志CD25的表达并降低IFN-γ和IL-10 的分泌.结论:获得稳定高表达人BTLA基因转染的细胞株.该细胞株在体外对抗人CD3 mAb刺激的T细胞的增殖与活化具有部分地抑制作用.
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