腺病毒介导的白介素24联合放疗对CNE-2Z细胞株及其裸鼠移植瘤的抑瘤增效作用

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目的 研究以腺病毒为载体的白细胞介素24(IL-24)基因(简称AdVIL-24)过表达对人CNE-2Z鼻咽癌细胞体内外放疗的抑癌增效作用及潜在的作用机制.方法 将AdVIL-24感染CNE-2Z细胞,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法及Western blot法检测IL-24在CNE-2Z细胞中的转录和表达.体外实验:将PBS组、AdV组、AdVIL-24组、放疗组及AdVIL-24联合放疗组的CNE-2Z细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CNE-2Z细胞的生长情况;碘化丙啶(PI)染色检测细胞周期,Annexin-V-PE/7-AAD染色检测CNE-2Z细胞凋亡率的变化;RT-PCR检测CNE-2Z细胞中P21、P27、cyclin E、CDK2、Bcl-2、Bax的转录;Western blot检测CNE-2Z细胞中P21、P27、cyclin E、CDK2、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达.体内实验:采用CNE-2Z细胞株建立人鼻咽癌裸鼠模型,然后将各组荷瘤裸鼠瘤体进行相应处理,动态测量肿瘤体积及最后取瘤称量重量;免疫组化检测P21、P27、cyclin E、CDK2、Bcl-2、Bax、Caspase-3、CD34、VEGF等因子的表达以及微脉管密度.采用金正均法(Q值)计算联合用药后的最终效应.结果 体外实验:AdVIL-24联合放疗组能使CNE-2Z细胞生长出现抑制(P<0.05,Q3d=0.916,Q4d=1.050);G1期阻滞(50.37%,P<0.05,Q=1.042);并诱导其凋亡(48.82%,P<0.05,Q=1.042);能明显上调P21、P27、Bax/Bcl-2、Caspase-3等基因转录和表达,下调cyclin E、CDK2基因的转录和表达(P<0.05;QP21 =0.959,QP27 =0.956,Qcyclin E=1.078,QCDK2=1.046,QBax/Bcl-2=0.995).体内实验:AdVIL-24联合放疗组能使CNE-2Z移植瘤生长出现抑制(P<0.05,Qvolume14=1.053,Qweight=1.004);诱导其凋亡(P<0.05,Q=0.974);上调P21、P27、Bax/Bcl-2、cleaved-Caspase-3的表达,下调cyclin E、CDK2的表达(P <0.05,QP21=0.920,QP27=0.937,Qcyclin E=1.060,QCDK2=1.019,QBax/Bcl-2=0.982,Qcleaved-Caspase-3=0.927);CD34、VEGF的表达以及微脉管密度较弱(P<0.05;QCD34=0.990,QMVD=0.988).放疗组VEGF的表达出现了明显的表达增强(P<0.05),然而AdVIL-24能够明显抑制其表达(P<0.05).结论 AdVIL-24联合放疗能有效抑制肿瘤的生长促进其凋亡,是治疗鼻咽癌的一种可能有效的方法.

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